原始的なヒトT細胞における多重複写体調節と代謝工学のための多機能CRISPR-Cas13dプラットフォーム

科学分野:

• 免疫学
• 分子生物学
• バイオテクノロジー

背景:

• CRISPR-Cas9ゲノム編集は安全性,有効性,T細胞治療の範囲に制限があります.
• 先進的なツールの開発はT細胞ベースの免疫療法の強化に不可欠です.

研究 の 目的:

• T細胞のトランスクリプトーム制御のための新しいCRISPR-Cas13dベースのプラットフォームである複数のエフェクタガイド配列 (MEGA) を導入する.
• プログラム可能でスケーラブルで リバーシブルなヒトT細胞の 遺伝子ノックダウンの能力を実証する
• CAR T細胞の枯渇,結合性スクリーニング,代謝経路の障害におけるMEGAの応用を調査する.

主な方法:

• CRISPR-Cas13dのRNAターゲティング活性を利用して ゲノムDNAを改変せずに 遺伝子ノックダウンを行いました
• マシブ マルチプレックス ゲン 調節のための マルチプレックス エフェクタ ガイド アレイ (MEGA) を開発した.
• CAR T細胞枯渇モデルと組み合わせCRISPRスクリーニングでMEGAを適用した.
• 制御されたCARの活性化のためのMEGAの薬剤可調性規制を実施した.
• 免疫調節代謝経路の障害 T細胞の適性を高めるためにMEGAを使用した.

主要な成果:

• ヒトのT細胞における定量的な,可逆的な,そして大量複合的な遺伝子ノックダウンを達成した.
• CAR T細胞疲労モデルでの抑制受容体の上昇抑制に成功しました.
• 組み合わせCRISPRスクリーニングによるT細胞機能のペアレギュレータを特定した.
• 薬効性MEGAを使用したCAR活性化の受容体独立制御が実証された.
• 代謝経路の障害により,CAR T細胞の適性および抗腫瘍活性がin vitroおよびin vivoで向上した.

結論:

• MEGAはT細胞のトランスクリプトームを正確に制御するための多用途な合成ツールキットを提供します.
• このプラットフォームは従来のCRISPR-Cas9の限界を克服し,安全性と有効性を向上させました.
• MEGAは,がん免疫療法やその他のT細胞ベースのアプリケーションを進めるための大きな可能性を秘めています.