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人間の腫瘍死滅因子の補完的なDNAの分子クローニング

A M Wang, A A Creasey, M B Ladner

Science (New York, N.Y.)

|April 12, 1985

まとめ

研究者は,腫瘍細胞を選択的に損傷するタンパク質であるヒト腫瘍死滅因子 (TNF) を浄化しクローン化しました. この研究は,TNFのさらなる研究と潜在的な治療的応用を可能にします.

科学分野:

分子生物学は分子生物学である.
バイオケミストリーバイオケミストリー
免疫学免疫学とは

背景:

腫瘍死滅因子 (TNF) は,腫瘍細胞に対する選択的毒性を持つタンパク質です.
TNFの性質を理解することは,がん研究にとって極めて重要です.

研究の目的:

ヒトのTNFを白血病細胞から浄化する.
そのアミノ酸配列を決定し,対応するcDNAをクローンする.
バクテリアにおけるTNFの高レベルの発現を達成するために.

主な方法:

HL-60白血病細胞からのタンパク質浄化.
N端のアミノ酸配列決定.
合成オリゴヌクレオチドプローブを用いたcDNAクローニング.
核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析. 核酸配列分析.
ラムダPLプロモーターを使用したE. coliでの発現.

主要な成果:

人間のTNFは,細胞毒性および細胞静止性の活性を持つ17.3kDaのタンパク質として浄化されました.
N端のアミノ酸配列が決定されました.
233アミノ酸をコードするヒトTNFcDNA (1585bp) がクローンされました.
成熟型TNFは,残基77から始まり,76アミノ酸のリーダー配列を持つ.
E. coliにおけるTNFの高レベルの発現が達成されました.

結論:

ヒトTNFの浄化と特徴づけが成功しました.
人間のTNFcDNAのクローニングは,さらなる研究のためのツールを提供します.
エンジニアリングされたE. coliシステムは,大規模なTNF生産を可能にします.

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