レトロウイルスのベクター媒介による遺伝子の移転が,ヒトの造血原始細胞に発生する

科学分野:

• * 遺伝子療法による遺伝子治療
• * 分子生物学について
• * 血液形成幹細胞の研究

背景:

• *ヒト細胞への遺伝子移植は,治療応用において極めて重要です.
• *レトロウイルスベクトルは,遺伝物質の伝達方法を提供する.
• * 造血原細胞における遺伝子発現を理解することは,再生医療の鍵となる.

研究 の 目的:

• *ヒトのヒポキサンチン・フォスフォリボシルトランスフェラーゼ (HPRT) 遺伝子をヒトの骨髄細胞にインビトロゲン移植するために.
• * 移植された遺伝子の血液生成原細胞における成功表現と複製を実証する.
• * 幹細胞における遺伝子転送効率の評価のためのモデルを確立する.

主な方法:

• *ヒトの骨髄細胞のインビトロ感染で,複製能力のないレトロウイルスベクターが,突然変異したHPRT補完DNAを携えている.
• *ヘルパーウイルスによる超感染と,感染した細胞を長期培養で維持する.
• * HPRT欠乏性ネズミの線維芽細胞を用いたコロニー形成検査で,子孫ウイルスの産生を検出.
• * 半固体介質でのコロニーを刺激する因子を用いて,血液形成原始細胞の識別と分析.

主要な成果:

• *ヒトの骨髄細胞にヒトHPRT遺伝子の成功移転と発現.
• * 感染した骨髄細胞による子孫のHPRTウイルスの生成が確認されました.
• * 凝固していない細胞群の中で,粒細胞-マクロファージのコロニーを形成する能力を持つ血液形成原始細胞が特定されました.
• *クローン化されたコロニー形成ユニットは,子孫のHPRTウイルスを生成し,これらの祖先細胞への遺伝子転送を確認しました.

結論:

• *ヒトのHPRT遺伝子をヒトの骨髄細胞にレトロウイルスベクター媒介の遺伝子転送が可能である.
• * 血液形成原始細胞は感染に成功し,移植された遺伝子を発現させることができます.
• *この研究は,血液形成障害に対する遺伝子治療に関するさらなる調査のための基盤を提供します.