ヒトのフォン・ウィレブランド因子のためのcDNAの分子クローン:新しい方法による認証

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 遺伝学 遺伝学とは
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• フォン・ウィレブランド因子 (vWf) は,血液静止に不可欠です.
• vWf mRNAの正確な識別は,その調節と機能を理解するために不可欠です.
• cDNAクローン検証のための既存の方法は,制限されることがあります.

研究 の 目的:

• 人間のフォン・ウィレブランド因子 (vWf) mRNAの部分的なcDNAクローンを特定し,特徴づけること.
• cDNAクローンの真正性を検証するための信頼性の高い方法を確立する.

主な方法:

• 免疫隔離されたvWf mRNAの放射性標識の逆転写を用いた内皮細胞のcDNAライブラリのスクリーニング.
• 特定のmRNAトランスクリプトを識別するためのハイブリダイゼーション.
• SP6RNAポリメラーゼを用いたcDNAクローンのインビトロトランスクリプション.
• ウサギの網膜細胞溶解体における合成RNAの翻訳.
• アンチ-vWf抗体を用いて合成されたポリペプチドの免疫圧縮.

主要な成果:

• 人間のvWf mRNAの2.4kbの部分的なcDNAクローン,pDL34と指定されました.
• pDL34は9.5kbの内皮細胞関連mRNAに選択的にハイブリッド化しました.
• In vitroのpDL34のトランスクリプトは,ユニークなポリペプチドの合成を指揮した.
• これらのポリペプチドは,免疫プレシピテーションによってvWfに関連していることが確認されました.

結論:

• 特定されたクローンpDL34は,人間のvWf mRNAの部分的なコピーである.
• cDNAクローンのin vitro転写と翻訳は,抗体がある場合にクローンの検証のための貴重な方法を提供します.