再結合プラズミドによるE. coliのミニセルにおけるタンパク質発現. | JoVE Visualize

科学分野:

分子生物学は分子生物学である.
再結合DNA技術による再結合DNA技術
遺伝子発現分析遺伝子発現分析

背景:

バクテリアの発現システムは,真核生物の遺伝子機能の研究に不可欠です.
異種のDNA断片がプラズミドの中でどのように統合され,表現されるかを理解することは,遺伝子工学にとって不可欠です.

研究の目的:

E. coliのミニセル内の様々な源からのクローンDNA断片によって導かれたポリペプチド合成を調査する.
DNA挿入部位がプラズミドでコードされた遺伝子発現に与える影響を分析する.

主な方法:

再結合プラズミッドを用いたE. coliミニセルにおけるポリペプチドの合成.
カリフラワーモザイクウイルス,Drosophila melanogaster,マウスミトコンドリアからのDNA断片の分子クローン.
ポリペプチド発現の分析と,プラズミド媒体の挿入への依存.

主要な成果:

カリフラワーモザイクウイルスのDNA断片は,プラズミド挿入とは独立して,特定のポリペプチドの高レベルの合成を導いた.
ドロソフィラ・メラロノガスターのDNA断片はポリペプチド合成を開始したが,終結はプラズミドに依存していた.
ColE1およびpSC101プラズミドのEco RI部位に外来DNAを挿入すると,プラズミドでコードされたポリペプチドの発現が変化し,不活性または切り離されたタンパク質が生じる.

結論:

クローンされたカリフラワーモザイクウイルスDNAには,ポリペプチド合成のための機能的発現信号が含まれています.
ドロソフィラ・メラノガスターのDNAは,E. coliのポリペプチド発現に影響を与える複雑な調節要素を示しています.
Eco RIのようなプラズミドエンジニアリングサイトは,不可欠なプラズミド遺伝子の完全性と機能を維持するために不可欠です.