制御された順次トランペプチデーション反応のためのエンジニアリングされた基板特異性を持つアスパラギニルリガゼ
Yan Zhou1, Simon J de Veer1, Tristan J Tyler1
1Institute for Molecular Bioscience, Australian Research Council Centre of Excellence for Innovations in Peptide and Protein Science, The University of Queensland, Brisbane, QLD 4072, Australia.
設計されたアスパラギニルリガゼは 新しいタンパク質の設計の可能性を提供します OaAEP1の単一の変異 (Y188A) は,直交基板特異性を生み出し,連続反応と新しいペプチド合成を可能にします.
科学分野:
- 生物化学
- 酵素学
- タンパク質工学
背景:
- トランスペプチダゼはペプチドとタンパク質工学の重要なツールです.
- アスパラギニルリガゼは,定義された特異性を持つ高効率のトランスペプチダゼである.
- 高度な配列トランペプチデーションには,直角的な特異性を持つ工学的な変種が必要である.
研究 の 目的:
- アスパラギニルリガゼOaAEP1を基板特異性のために設計する.
- 新しいペプチド合成アプリケーションのためのエンジニアリングされたリガースの可能性を調査する.
主な方法:
- OaAEP1にアミノ酸置換を導入するために,サイト指向型変異が使用されました.
- 基板の認識を評価するために酵素活性アッセイを行った.
- タンパク質の標識と周期性ペプチドの合成のための連続結合反応が行われました.
主要な成果:
- OaAEP1における単一のアミノ酸置換 (Y188A) は,直角的基板特異性を生み出した.
- Y188A変異体は,親酵素とは異なる新しい基板配列を認識しました.
- このエンジニアリングされたリガゼは,二重のN/C末端タンパク質ラベリングとワンポットサイクルペプチド合成を含む制御された配列反応を可能にしました.
結論:
- OaAEP1のY188A変異は,連続トランスペプチデーションのための強力なツールを提供します.
- エンジニアリングされたアスパラギニルリガゼは タンパク質の改変とペプチドの合成のための新しい戦略を解き放つことができます
- Tyr188残基は,アスパラギニルリガゼ基板特異性の一般的な決定因子であるようです.
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