プリズマベースのTIRFとコンフォカル顕微鏡を統合する: smFRET実験のための経済的なアプローチ
Pratibha Agarwala1, Dibyendu K Sasmal1
1Department of Chemistry, Indian Institute of Technology Jodhpur, Jodhpur, RJ, India.
Current protocols
|August 20, 2025
まとめ
この研究では,プリズマベースの全内反射光顕微鏡 (p-TIRF) の建設のための費用対効果の高い方法が詳細に示されています. このセットアップは,先端の単分子研究のための既存のコンフォカル顕微鏡を強化します.
科学分野:
- バイオ物理学
- 顕微鏡検査
- 分子生物学
背景:
- 全内反射光顕微鏡 (TIRF) は高解像度で分子動態をリアルタイムで観測することができます.
- プリズマベースのTIRF (p-TIRF) は,マクロ分子複合体,膀,およびタンパク質-DNAの相互作用を研究するために適応可能です.
- TIRF顕微鏡は,単一分子レベルで分子相互作用を分析することによって,細胞機構の洞察を提供します.
研究 の 目的:
- プリズマベースのTIRFセットアップを構成するための詳細で費用対効果の高いプロトコルを提示します.
- 共有光源を使用してTIRFイメージングのために既存のコンフォカル顕微鏡を適応させる.
- 単分子光共振エネルギー伝送 (smFRET) 実験のためのp-TIRFセットアップの構築,組み立て,並べ替え,サンプルの準備のためのチュートリアルを提供する.
主な方法:
- プリズマベースのTIRFモジュールとコンフォカル顕微鏡の統合
- コンフォカルとTIRFの両方のモダリティの共有光源の使用.
- p-TIRFセットアップの構築,アラインメント,およびsmFRETのサンプル準備のためのステップ・バイ・ステッププロトコル.
主要な成果:
- 機能的で費用対効果の高いp-TIRFセットアップが成功裏に構築され,コンフォカル顕微鏡と統合されました.
- 詳細なプロトコルにより 研究室は 画像処理能力を拡張できます
- smFRETを含む高度な単分子実験に適しています.
結論:
- このプロトコルは,既存のコンフォカル顕微鏡を持つ研究室に,高度なTIRFイメージング技術を採用することを可能にします.
- 費用対効果の高いp-TIRFセットアップは,生物学的プロセスの高解像度の単分子研究を容易にする.
- 細胞内の分子メカニズムを調査するための多用途のプラットフォームを提供します.
関連する概念動画
Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy
6.4K
Total internal reflection fluorescence microscopy or TIRF is an advanced microscopic technique used to visualize fluorophores in samples close to a solid surface with a higher refractive index, such as a glass coverslip. TIRF only allows fluorophores in proximity to the solid surface to be excited. When light from a medium with a lower refractive index (such as air) hits the glass coverslip at a critical angle, the light undergoes total internal reflection stead of passing through the glass.
6.4K
Confocal Fluorescence Microscopy
14.1K
Confocal microscopy is an advanced microscopic technique. The prime advantage of the confocal microscope over other microscopy techniques is its ability to block the out-of-focus light from the illuminated samples using pinholes. It is widely used with fluorescence optics to obtain high-resolution, sharp contrast images. Unlike optical microscopes, confocal microscopes use a focused beam of light laser to scan the entire sample surface at different z-planes. These microscopes are, therefore,...
14.1K
Super-resolution Fluorescence Microscopy
7.5K
Super-resolution fluorescence microscopy (SRFM) provides a better resolution than conventional fluorescence microscopy by reducing the point spread function (PSF). PSF is the light intensity distribution from a point that causes it to appear blurred. Due to PSF, each fluorescing point appears bigger than its actual size, and it is the PSF interference of nearby fluorophores that causes the blurred image. Various approaches to achieving higher resolution through SRFM have recently been...
7.5K


