相対AFM/光顕微鏡を用いた核封筒のイメージング

科学分野:

• 細胞生物学
• バイオ物理学
• 顕微鏡検査

背景:

• 核膜 (NE) は,内外膜を持つ重要な真核構造である.
• 既存のNE製剤は,膜張力喪失により核毛孔複合体 (NPC) の形状を変えることができる.
• 原子力顕微鏡 (AFM) は,NE構造をイメージするための強力なツールです.

研究 の 目的:

• 培養された哺乳類の細胞から無傷な核封筒 (NEs) を準備するための新しい方法を開発する.
• 試料の準備中に核孔複合体 (NPC) の原生構造を保存する.
• AFMと相関顕微鏡を使用して,内外核膜の両方の高解像度イメージングを可能にします.

主な方法:

• 培養された哺乳類の細胞から核を抽出し,ガラス基板に貼り付けます.
• 膜の緊張とNPCの整合性を維持するために,核の穏やかな開口.
• 免疫ラベリングはAFMと直接のストキャスティック光学再構築顕微鏡 (dSTORM) と組み合わせて,相関イメージングを行う.

主要な成果:

• この新製法では,NE膜の張力とNPC構造をうまく保ちます.
• 内外核膜の両方の高解像度AFMイメージングが達成されます.
• 関連AFM/dSTORMイメージングは,詳細な構造と分子情報を提供します.

結論:

• このプロトコルは,形状が保存されたNEとNPCを研究するための堅固なアプローチを提供します.
• この方法は,植物細胞や組織を含む様々な細胞モデルに適応できます.
• 生物学的な洞察を深めるための 高度な相関イメージング技術です