マルチプレックスされた量子遺伝子高通量スクリーニングプラットフォームを使用して,mRNA処理の選択的小分子調節器の識別

科学分野:

• 分子生物学
• 薬物の発見
• アッセイ開発

背景:

• 細胞ベースの多重検査による高通量スクリーニング (HTS) は,生物学的プロセスの調節因子を特定するために極めて重要です.
• mRNA処理を調節する小分子を発見するには 敏感で特殊なスクリーニングプラットフォームが必要です

研究 の 目的:

• 複数の標的遺伝子のトランスクリプトを同時に定量化するための複数の珠ベースのHTS測定法を開発する.
• Luminexプラットフォームで新しいQuantiGeneアッセイを使用して,mRNA処理の選択的な小分子調節剤を特定する.

主な方法:

• LuminexプラットフォームでマルチプレックスされたビーズベースのQuantiGeneアッセイを開発し,同時に遺伝子トランスクリプトを定量化しました.
• スクリーニング・アーティファクトとプレート・バリエビリティを軽減するために,二重の正規化ヒット・コール・パイプライン (プレートと井戸ベースの) を実装した.
• 疾患に関連する細胞系における4点濃度反応リアルタイムPCR (qPCR) アッセイを用いて検証されたヒット.

主要な成果:

• このアッセイでは,mRNA処理に関与する個々の標的遺伝子を選択的に調節するユニークな化合物を成功裏に特定した.
• 双重正常化戦略により 偽否定が減り,ヒット確認率が向上しました
• 化学的モチーフの分析により,特定の標的に対する既知のおよび新しいエスカフォルドが明らかになり,アクティブの5%のみが3つのターゲットに対して広範な活動を示した.

結論:

• 開発された複数のHTSプラットフォームは,選択的な小分子調節器のmRNA処理を特定するためのスケーラブルで信頼性の高い戦略です.
• このアッセイは,早期の薬剤発見に適用可能な,強度と翻訳的関連性を示しています.
• この発見は,複雑な生物学的経路の高度選択的調節物質を検出するプラットフォームの能力を強調しています.