超高通量細胞ベースの質量スペクトロメトリフロースアッセイが,パス選択型インシチュアスクリーニングアプローチとして

科学分野:

• 生物化学
• 細胞生物学
• 分析化学

背景:

• 生物化学的スクリーニングにおける従来の光学的な読み取りは,速度と直接性の制限に直面します.
• 酵素活性検出は 薬の発見と細胞経路の理解に不可欠です
• 質量スペクトロメトリ (MS) は,敏感で特定の検出能力を提供します.

研究 の 目的:

• 細胞ベースの,in situ 音響射出質量スペクトロメトリ (Echo-MS) のスクリーニングアプローチを提示する.
• 既知の阻害剤を用いてグルタミンゼ1 (GLS1) 経路をプロファイリングするためのこのMSベースの試験を検証する.
• 粘着性細胞における高通量スクリーニング (HTS) のためのEcho-MSの有用性を実証する.

主な方法:

• 細胞活動のトレーサとして,よく特徴づけられた同位体濃縮代謝物質を使用した.
• 無傷の細胞内の酵素活性を直接検出するためにEcho-MSを適用した.
• 生化学的および原始的なヒト細胞HTS形式の両方で測定を検証した.
• ヒトのGLS1標的の既知の阻害剤を概念証明のスクリーニングに使用した.

主要な成果:

• GLS1阻害剤の生化学的および細胞的効能との間の優れた調整を達成しました.
• Echo-MSを用いた細胞ベースの in situ スクリーニングの実現可能性を実証した.
• 生理学的に重要なアデレント細胞をプロファイルする能力を示した.
• 従来の光学方法と比較できる高いスループット能力を確認した.

結論:

• 提示された直接的な高通量質スペクトロメトリー活性測定は,有望な細胞ベースのスクリーニングアプローチです.
• エコー-MSは,検出抗体や細胞測定における他のラベル付け方法の必要性を排除します.
• この方法はGLS1のような標的の効率的な薬剤発見と経路分析を容易にする.