内生レトロウイルスのような粒子欠乏CHO細胞は,CRISPRまたはshRNAによって生成され,レトロウイルスエンベロープタンパク質の細胞表面表現に基づいて濃縮されます

科学分野:

• バイオテクノロジー
• 分子生物学
• 細胞生物学

背景:

• 中国ハムスター卵巣 (CHO) 細胞の内生的な配列からのレトロウイルスのような粒子 (RVLP) は,バイオ製造における安全性リスクをもたらす.
• RVLPは哺乳類の白血病ウイルスに似ており,感染力がないにもかかわらず,緩和戦略を必要とします.

研究 の 目的:

• CHO細胞のRVLP生成を妨げるための遺伝子工学戦略を開発し,検証する.
• RVLP欠陥のCHO細胞クローンを生物製造用として選択する方法を確立する.

主な方法:

• CRISPRとshRNAの遺伝子編集を用いて,RVLPのヌクレオチド配列を標的にした.
• CHO細胞の表面にRVLPエンベロップ (Env) タンパク質を検出するための特定の抗体を生成した.
• RVLPタンパク質発現の低下に基づくRVLP欠乏性のクローン選択

主要な成果:

• CRISPRとshRNAは,エンジニアリングされたCHO細胞におけるRVLPの生成を効果的に低下させた.
• 抗体ベースのスクリーニングは,RVLP欠陥のクローンの効率的な選択を容易にした.
• 改造されたCHO細胞は,再結合ウイルスのような粒子 (VLP) の生成を維持または強化しました.

結論:

• 遺伝子工学は,CHO細胞由来生物製造におけるRVLPに関連する安全リスクを軽減するための実行可能な戦略を提供します.
• このアプローチは,従来のウイルスクリアランス方法と相容れない複雑な生物学的薬剤に特に有益です.
• RVLP欠乏CHO細胞は,バイオセラピーの製造のためのより安全なプラットフォームです.