マイクロフローLC-MS/MSは,再生性アデノ関連ウイルスのカプシドにおけるプラットフォーム特有の翻訳後の改変シグネチャを明らかにし,強化された効能と安定性に関連しています.遺伝子療法の品質管理の枠組み

科学分野:

• 遺伝子療法のベクトル特性
• バイオ医薬品製造
• プロテオミクスと翻訳後の改変

背景:

• 再結合アデノ関連ウイルス (rAAVs) は重要な遺伝子治療ベクターですが,カプシドの翻訳後の改変 (PTMs) の理解は限られています.
• PTMは,rAAVの効能,免疫性,および製造の一貫性に重大な影響を及ぼしますが,異なる生産プラットフォームでの特徴は不完全です.
• rAAVの生成を最適化し,治療効果を確保するために,PTMの包括的な分析が必要である.

研究 の 目的:

• 臨床的に重要なrAAV5およびrAAV9血清型における翻訳後の改変 (PTM) を包括的に分析し,比較する.
• 哺乳類 (HEK293) と昆虫 (Sf9) の細胞生産プラットフォームにおけるベクトル能力と感染力に対するPTMの影響を評価する.
• rAAVバッチの一貫性を監視するための潜在的な品質属性としてPTMプロファイルを確立する.

主な方法:

• 電子活性解離 (EAD) と組み合わせたマイクロフローLC-MSは,rAAVベクトルのPTM分析に使用された.
• ベクターは,HEK293とSf9のセルで,純度と熱安定性の条件が一致した状態で生成された.
• PTMの特徴化に並行して,インビトロの効能および感染性アッセイが行われました.

主要な成果:

• Sf9から派生したrAAVベクトルは,HEK293から派生したベクトルと比較して14%高いPTM負荷を示した.
• HEK293から派生したrAAVは,1. 9倍以上の効能を示し,物理的/感染性粒子の比率 (P:I) が著しく低下した.
• EADの断片化により,特定の脱アミデーション部位に関連したアイソアスパラート形成が確認され,Sf9 rAAV9バッチのPTM部位数では低い変動が観察されました.

結論:

• PTMの風景はHEK293とSf9の生産プラットフォームの間で区別され,rAAVベクトルの効能と感染力に影響します.
• デアミデーションによるイソアスパルテート形成などの特定のPTMは,ベクトルの安定性と性能に影響を与える可能性があります.
• PTMプロファイリングは,rAAV遺伝子治療の製造における品質管理とバッチ一貫性モニタリングの有望な手段です.