SARS-CoV-2 プロテアースの活性を評価するための,迅速かつ堅牢なルシフェラーゼベースのレポーターシステム

科学分野:

• ウイルス学
• 生物化学
• 薬物の発見

背景:

• 有効なSARS-CoV-2抗ウイルス薬は不可欠ですが,ウイルスの進化には新しい治療戦略が必要です.
• メインプロテアゼ (Mpro) のようなウイルスプロテアゼをターゲットにすることは,抗ウイルス開発の鍵となるアプローチです.

研究 の 目的:

• SARS-CoV-2 Mproの活動を評価するための,敏感で迅速な発光ベースのレポーターシステムを開発する.
• Mpro 阻害剤を特定し,抗ウイルス活性を予測するレポーターシステムの有効性を検証する.

主な方法:

• 新しいレポーター系であるi-NSP4/5-Gluc2は,Mpro分裂部位を持つプロインタールキン1β断片に結合したガウシアルシフェラーゼ (Gluc) を使用して設計された.
• このシステムは,Mプロメディエーションによる分裂時に分泌されるGluc光度を測定した.
• このアッセイは感度と特異性のために最適化され,ニルマトレルビルで検証され,化合物ライブラリをスクリーニングするために使用されました.

主要な成果:

• i-NSP4/5-Gluc2システムは,Mproの活性性を検出する際に高い感度と特異性を示した.
• このアッセイでは,46の化合物のライブラリから潜在的なMpro阻害剤を成功裏に特定しました.
• 新たに特定された14の化合物のうち13は,生 SARS-CoV-2 に対する強力な抗ウイルス活性を示した.

結論:

• i-NSP4/5-Gluc2システムは,SARS-CoV-2 Mpro阻害剤の迅速なスクリーニングのための検証済みの高通量ツールです.
• このアッセイは,SARS-CoV-2および潜在的な将来のウイルス脅威に対する効果的な抗ウイルス化合物の発見を加速します.
• このシステムの予測力は ウイルスのパンデミックに対する 新しい治療法の開発を容易にするのです