骨格関節炎の研究のためのタンパク質リシンマロニレーションの検出と識別のためのクリック化学ベースのバイオートゴーナルアプローチ

科学分野:

• 生物化学
• 分子生物学
• 翻訳後の修正

背景:

• リンジンのマロニレーションは,翻訳後の変化で,タンパク質の機能に影響します.
• 軟骨のマロニレーション (Mak) の上昇は,骨格関節炎 (OA) の発症と関連しています.
• マロニル化標的を検出するための既存の抗体ベースの方法は限られている.

研究 の 目的:

• メタボリックラベルを付け タンパク質のマロニル化を検出する 新しい化学探査機 MA-diyne を導入する
• タンパク質のマロニル化標的を特定し,OAにおけるその役割を理解するためにMA-diyneを使用する.
• Sirtuinによるタンパク質マロニレーションの調節を調査する 5.

主な方法:

• 代謝タンパク質のラベル付けのためのアルキン機能化されたプローブ (MA-ディーン) の開発と応用.
• 標識されたタンパク質を光染料または親和性タグで結合させるための銅-I) 触媒化されたクリック化学.
• インゲル光,プルダウンアッセイ,パルスチェイス実験,標的の識別と検証のための定量プロテオミクス.

主要な成果:

• MA- ダインは様々な種類の細胞でタンパク質に組み込まれました.
• 既知のマロニル化標的 (例えばGAPDH,アルドラーゼ) と新しい標的 (例えばβ-アクチン,Stat3) を特定した.
• シルトゥイン5欠乏症はMA- ダインの変化を増加させ,シルトゥイン5は374の特定されたタンパク質を調節した.
• 定量プロテオミクスは1136のタンパク質と8903のペプチドを特定し,標識されたグループで有意な変化があった.

結論:

• MA-diyneは,タンパク質のマロニル化を研究するための効果的な化学ツールです.
• この探査は,特にOAの文脈で,マロニレーションのターゲットと機能を調査することを容易にする.
• この研究は,タンパク質のマロニル化を調節するSirtuin 5の役割についての洞察を提供します.