アセチル化H2A.ZフォトアフィニティプローブによるBPTFターゲットエンゲージ

科学分野:

• エピジェネティクス
• 癌 生物学
• プロテオミクス

背景:

• ヒストンの変種H2A.Zは癌の進行に関与しています.
• エピジェネティックリーダーのタンパク質BPTFの機能は,がんではしばしば失調する.
• アセチル化H2A.ZとBPTFの間の相互作用の直接的な検証は,弱い結合親和性のために欠けている.

研究 の 目的:

• アセチル化H2A.Z同型とBPTFの間の一時的な相互作用を捕捉するためのフォトアフィニティプローブを開発し,使用する.
• BPTFブロモドメインとアセチル化H2A.Zの間の直接的な相互作用を検証する.
• ヒトの非小細胞肺がん細胞におけるH2A.Zの自然なアセチル化パターンを特定する.

主な方法:

• N端のディアジリンとC端のバイオチンタグを持つ光親和性アセチルヒストンH2A.Zプローブ (同型IとII) の開発.
• BPTF-H2A.Zの相互作用を評価するために,SDS-PAGEに続くフォトクロスリンク実験.
• A549非小細胞肺がん細胞におけるH2A.Zアセチル化パターンを定量化するためのボトムアッププロテオミクス.

主要な成果:

• リコンビナントBPTFブロモドメインは,親和性依存およびアセチルライシン結合ポケット特異的な方法で,両方のH2A.Zイソフォームと直接相互作用する.
• 固有のBPTFは,H4K16acよりも効率が悪いが,A549細胞核溶解体内のアセチル化H2A.Zプローブによって写真クロスリンクされた.
• プロテオミクスは,K4ac,K7ac,K11ac,K15acを含む特定のアセチル化部位を持つH2A.Zの支配的なパターンとしてモノアセチル化を特定した.

結論:

• フォトアフィニティプローブは,H2A.Zを含む一時的なエピジェネティックタンパク質相互作用を捕捉するのに有効です.
• この研究は,BPTFとアセチル化H2A.Zの間の直接的な相互作用を検証した.
• インタラクトーム解析により,追加のH2A.Zの表遺伝子調節体を特定するために,さらなる最適化が必要である.