バシルス・アルティチューディニス (AS19) の2つのグルタマート脱水素酶遺伝子の機能的特徴と,溶性再結合体発現の最適化

科学分野:

• 微生物学
• 生物化学
• 分子生物学

背景:

• グルタミン酸脱水素酵素 (GDH) は,アミノ酸代謝,エネルギー生産,および生物における酸化還元バランスに不可欠である.
• バチルス・アルティチューディニスAS19のgdhAとgudB遺伝子はGDHをコードし,鉄を調節しますが,その特定の機能は不明です.

研究 の 目的:

• B. altitudinis AS19のgdhAとgudBの遺伝子とそのコード化されたタンパク質を分析する.
• GdhAとGudBの発現と浄化を最適化するために
• この2つのGDHの機能を理解するための基礎を提供するためです.

主な方法:

• MEGA,Expasy,SWISS-MODELを用いたバイオインフォマティック分析
• 誘導条件を最適化したプロカリオット系における異質表現.
• SDS-PAGE,ウエスタン・ブロット,質量スペクトロメトリー,酵素活性アッセイを用いたタンパク質の特徴化.

主要な成果:

• 系統遺伝学的分析により,バシルスにおけるGDHの進化保存が確認された.
• GdhAとGudBは,主に不規則なコイルとアルファヘリックス構造を持つ,水性,非分泌,非膜タンパク質として特定されました.
• SWISS-MODELは,GdhAをNADP特異性として,GudBをNADP特異性として予測した.
• 最適な条件では,SDS-PAGE,ウエスタンブロット,および質量スペクトロメトリーで確認された溶解性GdhAおよびGudBタンパク質が得られました.
• 再結合GdhAはNADPHで62. 7U/ mgの酵素活性を示した.

結論:

• この研究では,B. altitudinis AS19から2つの異なるグルタミン酸脱水素酵素を成功裏に特徴づけました.
• この結果は,GdhAとGudBの最適な発現と浄化プロトコルを確立しています.
• この結果は,B. altitudinis AS19におけるGdhAとGudBの特定の代謝作用に関する将来の調査のための基礎を築く.