Chd1 CHCTドメインとRtf1の間の直接的な相互作用は,Chd1の分布と活性遺伝子の核細胞位置を制御する

科学分野:

• 分子生物学
• エピジェネティクス
• 遺伝子規制

背景:

• RNAポリメラーゼIIによる転写には核細胞の再構成が不可欠である.
• Chd1 (染色体ヘリケーズDNA結合タンパク質1) は,核細胞を再構成する重要なタンパク質である.
• 以前の研究では,酵母におけるChd1の占有量がPaf1複合体のサブユニットRtf1と関連付けられていた.

研究 の 目的:

• Rtf1 と Chd1 の間の特定の相互作用領域を特定する.
• Rtf1-Chd1の相互作用を妨害する機能的影響を調査する.
• この相互作用が種間で保たれているかどうかを判断する.

主な方法:

• 相互作用するドメインを特定するための酵母-2-ハイブリッドアッセイ.
• 相互作用を妨害するサイト指向型変異.
• タンパク質占有率を評価するクロマチン免疫降水 (ChIP)
• 暗号的転写とヒストンの改変の分析

主要な成果:

• Rtf1のN端領域は,Chd1のCHCT領域と直接相互作用する.
• この相互作用を阻害する変異は5'遺伝子末端にChd1の誤局を引き起こします.
• 干渉は暗号的転写を増加させ,核細胞の位置とヒストンのマークを変化させます.
• マウスRTF1とCHD1/CHD2の間で同類の相互作用が観察されました.

結論:

• Rtf1-Chd1の相互作用は直接的であり,保存され,遺伝子の体内の適切なChd1機能に不可欠である.
• この相互作用は Chd1 を転写延長機構と結合させる.
• Chd1のCHCTドメインは,この保存されたメカニズムにおいて重要な役割を果たします.