CRISPR/Cas9駆動のAcMNPVのエンジニアリングは,再結合タンパク質の最適化のための二重gRNAを使用しています

科学分野:

• 分子生物学
• ゲノミクス
• バイオテクノロジー

背景:

• CRISPR/Cas9システムは 汎用的なゲノム編集ツールです
• バキュロウイルス発現ベクトルシステム (BEVS) は,再結合タンパク質生産に広く使用されています.
• バキュロウイルスのゲノムを最適化することで タンパク質の生産性を高めることができます

研究 の 目的:

• Autographa californica複数の核複合体ウイルス (AcMNPV) のゲノム削除のための二重単一ガイドRNA (sgRNA) のCRISPR/Cas9の最初のアプリケーションを報告する.
• 生物生産のための再結合タンパク質発現に対するこれらの消去の影響を評価する.
• CRISPR/Cas9を最小化されたバキュロウイルスのゲノムを設計するためのツールとして検証する.

主な方法:

• AcMNPVにおける標的型ゲノム削除のための二重 sgRNA CRISPR/Cas9アプローチを使用した.
• Sf9 昆虫の細胞に2つの異なるリボ核タンパク質 (RNP) コンプレクスを同時に供給した.
• バキュロウイルスゲノム内のタンデム遺伝子を含む遺伝子断片の削除を生成した.
• 昆虫の細胞と幼虫における再結合タンパク質 (eGFPとHRPc) の表現を評価した.

主要な成果:

• デュアルガイドCRISPR/Cas9システムを用いたAcMNPVゲノム削除の効率的な生成
• 遺伝子の消去は,再生タンパク質発現に様々な影響を及ぼし,一部の生産性を高めました.
• 特に,HRPcの発現は,Spodoptera frugiperdaの幼虫で3. 1倍まで増加した.
• 非必須の遺伝子の除去が 宿主系によってタンパク質の生産量に影響することを示した.

結論:

• 二重ガイドのCRISPR/Cas9編集は,バキュロウイルスゲノム工学の迅速かつ正確な方法です.
• この戦略により,バキュロウイルスのゲノムを最小限に抑え,バイオ生産を改善することができる.
• 遺伝子削除の宿主依存的効果は,BEVSの最適化の複雑さを強調しています.