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Updated: Sep 9, 2025
08:48
Quantitation of γH2AX Foci in Tissue Samples
Published on: June 28, 2010
14.5K
免疫光とフィジーソフトウェアを用いた放射線を受けた細胞におけるγH2AX焦点の定量化のためのプロトコル
Lu Deng1, Danning Wang1, Lingying Wu1
1Department of Gynecologic Oncology, National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, China.
Bio-protocol
|August 28, 2025
まとめ
この研究は,DNA二重鎖断裂 (DSB) を γH2AX焦点を通じて正確に定量化するためにフィジーマクロを使用して自動化されたワークフローを導入します. この方法は,細胞ストレス研究における再現性と高通量分析を強化する.
科学分野:
- 細胞生物学
- ゲノミクス
- 分子生物学
背景:
- ゲノム損傷と細胞のストレス反応を理解するために,DNAの二重鎖断裂 (DSB) の定量化が不可欠です.
- マーカー γH2AXはDSBで広く使用されているが,現在の定量化方法は標準化と再現性が欠けている.
- 手動または半量的な分析は,ユーザーバイアスを導入し,スループットを制限します.
研究 の 目的:
- 照射された細胞における γH2AX 焦点の定量化のための標準化された自動化されたワークフローを開発する.
- 複製性を向上させ,DNA二重鎖の断裂検出におけるユーザバイアスを軽減する.
- 核の焦点とコロニーのような構造の両方に適応可能な高スループット方法を作成します.
主な方法:
- 自動化された γH2AX焦点数計のためのカスタムフィジーマクロの開発.
- 細胞照射,免疫光染色,画像取得を含む標準化されたプロトコルの実装.
- クロノジェニックアッセイを含む多穴プレート形式のワークフローの適応.
主要な成果:
- 自動化されたフィジーマクロは,単核解像度を持つ核 γH2AX光焦点の高通量定量化が可能である.
- 標準化されたワークフローは,DNA二重鎖破裂検出における再現性とクロスサンプルの一貫性を保証します.
- このプロトコルは,核の焦点とコロニーのような構造の両方に対して,様々な測定形式で適用可能である.
結論:
- 提示された自動化されたワークフローは,DNA損傷を定量化するための再現可能で標準化された方法を提供します.
- このプロトコルは,γH2AX焦点の高通量分析を容易にし,ユーザバイアスを最小限に抑えます.
- この方法の適応性により,DNAダメージとクローン遺伝子検査の通常の実験室での使用に適しています.
