モノクローナル抗体におけるヒドロキシリン濃度に対する細胞培養の影響の解明 高通量分析量化と媒介成分を用いて

科学分野:

• 生物化学
• バイオ医薬品製造
• 分析化学

背景:

• ハイドロキシリシン (Hyl) はリンジンの翻訳後の改変である.
• 高いHylレベルは,調査を必要とする製品品質属性 (PQA) と考えることができます.
• Hylの初期検出は,完全質量分析とペプチドマッピングを用いて行われました.

研究 の 目的:

• モノクローナル抗体 (mAb) 産生中のハイドロキシリン (Hyl) 濃度の上昇を調査し,制御する.
• アップストリーム処理における高レベルのHylの根本的な原因を特定する.
• Hyl緩和のための堅実な分析とプロセス戦略を開発し,実施する.

主な方法:

• Hylの初期検出のための不変の質量分析とペプチドマッピング
• 正確な Hyl 定量化のために,分析方法のトリプティックから IdeS 消化への改定
• メディア組成 (メディアA vs. メディアB) とFe (III) 補給を含むアップストリームプロセスの最適化.

主要な成果:

• ヒル濃度は最初はメディアAで20%から35%で観察され,根本原因の調査が必要であった.
• トリプティックペプチドマッピングは,Hylレベルを約10倍低評価した.
• IdeS-消化により正確な定量化が行われ,Media BはHylを10%から15%まで減少させた.
• 媒体のFe (III) 濃度の上昇により,Hyl濃度が著しく低下した.
• Fe ((III) 補給は,500Lバイオリアクターのスケールアップ中に維持された堅実な緩和戦略であることが判明しました.

結論:

• 高いヒドロキシリシンは,有効に管理できるmAb生産における重要なPQAです.
• IdeS-消化は,トリプティックマッピングと比較して正確なHyl定量化のための優れた分析方法です.
• Fe ((III) 補給は,上流生物処理におけるHylレベルを制御するための実行可能でスケーラブルな戦略です.