質量スペクトロメトリーベースのプロテオミクス戦略で,長鎖Sアシレートペプチドを検出する

科学分野:

• 生物化学
• プロテオミクス
• 細胞生物学

背景:

• 長い鎖のS-アシレーションは,システイン残基に脂肪酸を加える重要なタンパク質改変である.
• この脂質変化は,タンパク質膜結合と細胞信号伝達経路に不可欠です.
• 分析上の課題は,S-アシレートペプチドの性および不安定なチオエステル結合から生じる.

研究 の 目的:

• 長鎖S-アシレートペプチドを検出するための質量スペクトロメトリのワークフローを開発し,最適化します.
• 様々なプロテオミクスのサンプル準備条件下でのチオエステル結合の安定性を調査する.
• タンパク質の長鎖S-アサイレーションを化学的誘導化なしに直接分析できるようにする.

主な方法:

• S-アシレートペプチドの分離を改善するために最適化された液体染色学.
• 異なるpH,還元剤,および消化条件下でのチオエステル結合の安定性を調査した.
• S-アシレートペプチドのMS/MS分析のためのCID,HCD,ETDの断片化方法を評価した.

主要な成果:

• 長い鎖のS-アシレートペプチドは,一般的にはpHの変動と還元剤に対する耐性を示した.
• トリプシン消化時間の延長により,いくつかのS-アシレートペプチドの信号が失われました.
• 高エネルギー衝突解離 (HCD) 断片化は,S-アシレートペプチドの最も多くの配列情報を提供しました.

結論:

• 最適化されたワークフローは,長鎖S-アシレーションの直接の識別と分析を容易にする.
• HEK293T細胞では,GNA13のダブルアシレーション状態とRhoBのSアシレーションとプレニレーションが同時に検出されました.
• この戦略は,性脂質の改変とタンパク質の機能とシグナル伝達におけるそれらの調節的役割の研究を支援する.