クロマトグラフィー・ガイデッド・コフレクション・マススペクトロメトリー・ストラテジーは,薬物によるタンパク質複合体の迅速なプロファイリングを目的とする

科学分野:

• プロテオミクス
• 化学生物学
• 分子細胞生物学

背景:

• タンパク質複合体は細胞の機能と薬物反応に不可欠です
• タンパク質複合体を分析するための従来のコフラクション質量スペクトロメトリ (CoFrac-MS) は,遅くて労働集約的です.
• 薬剤発見には,薬剤によって破壊されたタンパク質複合体の迅速な識別が必要である.

研究 の 目的:

• 薬剤によるタンパク質複合体を特定するための新しい,急速な染色学による戦略を導入し,検証する.
• タンパク質複合体の高解像度分離,正確な定量化,微分分析のためのXL-CoFrac-Q-MSワークフローを確立する.
• 薬物標的の相互作用を特定し,薬物メカニズムの解明におけるワークフローの有用性を実証する.

主な方法:

• XL-CoFrac-Q-MSワークフローを開発し,ピーク定量化のためのクロスリンク強化逆相液体染色法 (XL-CoFrac) を ChromaQuantソフトウェアと組み合わせました.
• 精密なピーク定量化 (CV < 1%) とタンパク質複合体の微分分析のためにChromaQuantを使用した.
• BCL-2阻害剤 (ABT-199) で治療された白血病細胞の薬物反応を分析するために,ワークフローを適用した.

主要な成果:

• XL- CoFrac- Q- MSは,高再現性 (R > 0. 98) のタンパク質複合体の迅速かつ正確なプロファイリングを可能にしました.
• このワークフローでは,ABT-199治療に対する反応として,BCL-2関連複合体を含む,薬剤によるタンパク質複合体を成功裏に特定しました.
• BCL-2 と FKBP38 の間のクロスリンクペプチドが特定され,薬剤耐性のメカニズムを潜在的に明らかにした.
• 経路濃縮分析により,ABT-199誘発のアポトーシスに関する洞察が得られました.

結論:

• XL-CoFrac-Q-MS戦略は,薬物によるタンパク質複合体の迅速な識別に重要な進歩をもたらします.
• このワークフローは,薬剤標的の効率的なスクリーニングと,薬理学的および病理学的文脈におけるタンパク質複合体のダイナミクスの解明を容易にする.
• この方法は,様々な干渉に対する細胞の反応を理解するための幅広い可能性を秘めています.