脂質ナノ粒子による複数のRNAの同時配送は,CAR-T細胞の正確な遺伝子編集を可能にします

科学分野:

• 免疫療法
• 遺伝子編集
• ナノテクノロジー

背景:

• 化学抗原受容体T (CAR-T) 細胞治療は,血液学的癌に対して有望であるが,ウイルスベクターと免疫抑制性腫瘍の微環境との課題に直面している.
• PD-1/PD-1経路はCAR-T細胞の有効性を阻害し,CRISPR/Cas9はPD-1ノックアウトによって活性性を高めるが,従来の電解はT細胞を損傷する.

研究 の 目的:

• 脂質ナノ粒子 (LNP) を使用してCAR-T細胞を設計するための新しい,効率的で安全な方法を開発する.
• PD-1 ノックアウトとマルチプレックス遺伝子編集を含むCAR-T細胞工学におけるLNP媒介投与の有効性を評価する.

主な方法:

• マルチプレックスRNA (CD19 CAR mRNA,Cas9 mRNA,およびPD-1を標的とする sgRNA) の共配のためにLNPを使用するエンジニアリングされたCAR-T細胞.
• 伝統的な電解と比べると,LNPのトランスフェクション効率と細胞活性を比較した.
• エンジニアリングされたCAR-T細胞の抗腫瘍活性を評価するために,in vitroおよびin vivo試験を実施した.
• PD-1,TRAC,B2Mを標的にするCas9 mRNAとsgRNAの共配によりマルチプレックス遺伝子編集が実証された.

主要な成果:

• LNPは,電解と比較して,より高いトランスフェクション効率と優れた細胞活性を達成しました.
• PD- 1 ノックアウトのエンジニアリングされたCAR- T細胞は,CD19+腫瘍細胞の特定の殺戮を in vitroで実証し,抗腫瘍活性を in vivoで強化した.
• LNP媒介マルチプレックス遺伝子エディティングを使用してPD-1,TRAC,B2Mのトリプルノックアウトに高いエディティング効率を達成した (それぞれ76%,86%,80%).

結論:

• LNP媒介による投与は,CAR-T細胞の設計のための有望なプラットフォームであり,ウイルスベクターと電解に対する安全性と有効性を向上させています.
• この技術は,PD-1 ノックアウトとマルチプレックス遺伝子編集を含む効率的なCAR-T細胞改変を可能にする.
• LNP戦略は次世代のCAR-T細胞治療の開発に 大きな可能性を秘めています