CRISPRベースのシステムによるトランスゲン統合のための山羊H11とRosa26プラットフォームの検証:安定したトランスゲン発現と遺伝子バイオセーフティに関する調査

科学分野:

• 家畜の遺伝学
• 遺伝子編集技術
• ゲノムロシウムの検証

背景:

• CRISPR/Cas9は 場所特有の家畜の遺伝子編集を可能にします
• 安定したトランスゲン発現は,H11やRosa26のような検証されたゲノムロキに統合する必要があります.
• これらの場所の評価は宿主のゲノム機能の障害を最小限にします.

研究 の 目的:

• H11とRosa26の位置を評価して,ヤギの標的外遺伝子の統合を評価する.
• 生物学的適用性の多次元評価システムを確立する.
• 家畜の遺伝子改良のための枠組みを提供する.

主な方法:

• 緑色光タンパク質 (EGFP) レポーター遺伝子をH11とRosa26の位置で生成したドナー細胞は,CRISPR/Cas9によるホモロジー誘導修復を用いた.
• トランスジェニックのクローン胚と子孫を体細胞の核移転で生成した.
• 細胞,胚,個体レベルで多次元分析を行った.

主要な成果:

• 細胞統合部位で安定して効率的なEGFP発現が観察された.
• ドナー細胞は正常な細胞サイクル,増殖,アポトーシスを維持し,隣接する遺伝子転写の変化はなかった.
• 植入前の胚におけるEGFPの持続的発現;野生型に似た発達指標
• クローンされた子孫は,野生型の成長とEGFPの広範な発現を8つの組織で示した.

結論:

• H11とRosa26ロシは,山羊の効率的で安定したトランスゲン統合をサポートします.
• この研究は,ヤギにおけるCRISPR/Cas9のクロススケール (細胞-胚-個体) 検証を初めて提供した.
• 結果は,家畜の遺伝子改良を進めるための正確で予測可能な技術的枠組みを提供します.