エントロシンAのSaccharomyces cerevisiaeにおける発現

Michelle Rossouw¹, Gerhardt Coetzee², Rosemary A Cripwell¹

¹Department of Microbiology, Stellenbosch University, Private Bag X1, Matieland, 7602, South Africa.

|August 30, 2025

まとめ

セカロミセア酵母におけるエンテロシンAの再結合発現は,大規模生産のための有望な方法である. この研究では,付属タンパク質の共発現によってプランタリシン423の活性が改善される可能性のある,バクテリオシンのための生存可能な宿主として酵母が強調されています.

科学分野:

バイオテクノロジー
微生物学
分子生物学

背景:

クラスIIのバクテリオシンは,乳酸細菌によって生成される抗菌ペプチドである.
Saccharomyces cerevisiaeにおける再結合発現は,これらのバクテリオシンのためのスケーラブルな生産システムを提供する.
ディスルフイド結合形成は,バクテリオシン活性に不可欠であり,ネイティブオペロンはしばしば,このプロセスを促進するために付属タンパク質を含みます.

研究の目的:

コドン最適化されたエンテロシンA,プランタリシン423,およびSaccharomyces cerevisiaeにおけるムンディチンST4SAの再結合表現を比較する.
これらの再結合ペプチドのバクテリオシン活性と翻訳後の変化を評価する.
大規模なバクテリオシン生産のための宿主としてのS. cerevisiaeの可能性を評価する.

主な方法:

エントロシンA (EntA_Opt),プランタリシン423 (PlaX_Opt),およびムンチキンST4SA (MunX_Opt) に対するコドン最適化された遺伝子はS. cerevisiaeで発現した.
ペプチド発現レベルは,シェイクフラスクとバッチ発酵を使用して定量化されました.
バクテリオシン活性が評価され,二硫化結合形成を含む翻訳後の変更は,Nano- LC- MS/ MSを用いて分析された.

主要な成果:

シェイクボットとバッチ発酵は,PlaX_OptとMunX_Optと比較して,より高いレベルのEntA_Optを生成しました.
エントロシンAとムントチシンST4SAは,プランタリシンより高いバクテリオシン活性を示した.
ナノ-LC-MS/MS分析では,PlaX_Optと比較して,EntA_Optペプチドの正しい二硫化結合構造が明らかになった.

結論:

Saccharomyces cerevisiaeは,IIaクラスのバクテリオシン,特にエンテロシンAの再結合生成のための有望な宿主です.
再結合プランタリシン423の活性低下は,S. cerevisiaeにおけるその原生付属タンパク質 (PlaC) の欠如に起因する可能性がある.
再結合プランタリシン423の活性を増強するために,付属タンパク質の共発現を研究する必要があります.

キーワード:

サッカロミセス・セレヴィセアクラスIIaのバクテリオシンエントロシンA マントチシンST4SA プランタリシン 423

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