タンパク質抗原性を維持するために必要な結合化学を特に強調したSARS-CoV-2変種に対するリポソームベースの血清検査の開発

科学分野:

• 生物結合化学
• 免疫診断
• リポソーム技術

背景:

• タンパク質とリポソームの結合は生物分析と薬物投与に不可欠です.
• SARS-CoV-2 中和抗体を定量化するには,強力な測定方法が必要です.
• 懸念される変種 (VoC) 間のスパイクタンパク質配列の変動は,抗体検出に課題をもたらす.

研究 の 目的:

• SARS-CoV-2 中和抗体を定量化するためのリポソームベースの代替検査を開発し,検証する.
• SARS-CoV-2変種におけるタンパク質の機能性および抗原性に対する異なる結合化学の影響を調査する.
• リポソームのサイト・ディレクテッド・プロテイン・イモビライゼーションのための汎用的なプラットフォームを確立する.

主な方法:

• SARS-CoV-2 スパイクタンパク質の変種 (RBD) をN端のCys-タグとC端のAvi-タグの戦略を用いてサイト指向で不動化する.
• サイト固有のバイオチニレーションとニュートラビジン-リポソーム結合とのEDC/NHS化学の比較
• 患者の血清を用いた偽ウイルス中和検査に対するリポソーム検査の検証

主要な成果:

• 標準的なEDC/NHS結合化学は,さまざまなスパイクタンパク質の機能の損失をもたらしました.
• サイト固有のバイオチニレーションとニュートラビジンリポソームの固定化により,タンパク質の機能が回復し,すべての変種で貯蔵の安定性が向上しました.
• 開発されたリポソームアッセイは,偽ウイルス中和検査と高い相関性を示し,アルファ/デルタおよびオミクロン変異の微分中和パターンを特定した.

結論:

• ニュートラビジンリポソームは,タンパク質配列の変異にかかわらず,部位指向のタンパク質固定化のための多用途のプラットフォームを提供します.
• このアプローチはタンパク質の安定性と機能性を向上させ,診断試験の開発に不可欠です.
• 適応性のあるリポソーム測定技術は,診断用途の様々なタンパク質とペプチドに適用できます.