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Lagging Strand Synthesis01:59

Lagging Strand Synthesis

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During replication, the complementary strands in double-stranded DNA are synthesized at different rates. Replication first begins on the leading strand. Replication starts later, occurs more slowly, and proceeds discontinuously on the lagging strand.
There are several major differences between synthesis of the leading strand and synthesis of the lagging strand. 1) Leading strand synthesis happens in the direction of replication fork opening, whereas lagging strand synthesis happens in the...
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Chromosome Replication02:31

Chromosome Replication

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Before a cell can divide, it must accurately replicate all of its chromosomes, including the DNA and its associated histone and non-histone proteins.  This process begins at numerous origins of replication during the S phase of the cell cycle in each of a cell’s chromosomes simultaneously. Certain nucleotides can act as origins of replication, but these sequences are not well defined - especially in complex, multi-cellular, eukaryotic species. The length of DNA that spans an origin...
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STAR protocols
|September 5, 2025
PubMed
まとめ

増殖する細胞の全ゲノムにわたる DNA複製のタイミングを マップする新しい方法である BioRepli-seq を開発しました このテクニックは,精密なRTプロファイリングのためにバイオチニレーションと次世代シーケンシングを使用します.

キーワード:
細胞生物学遺伝学ゲノミクス分子生物学

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480

科学分野:

  • ゲノミクス
  • 分子生物学
  • 細胞生物学

背景:

  • DNA複製タイミング (RT) は,S段階のゲノム複製の細胞タイプ特異的な順序を定義します.
  • RTを理解することは,ゲノム調節と細胞過程の解読に不可欠です.

研究 の 目的:

  • ゲノム全体のRT決定のための新しいバイオチニレーションベースの方法であるBioRepli-seqを提示します.
  • 増殖する細胞タイプにこのテクニックを適用するための詳細なプロトコルを提供すること.

主な方法:

  • ヌクレオチドアナログパルスラベルとDNAコンテンツベースの細胞分類を使用します.
  • バイオチニル化とDNAの断片化に クリック化学を使います
  • 次世代のシーケンシング分析のためのオンビーズシーケンシングライブラリ生成が含まれています.

主要な成果:

  • 精密なRT測定のためにバイオチニレーションを用いたRepli-seqを成功裏に適応させた.
  • 様々な細胞の増殖に適合する 総合的なプロトコルを開発した
  • ハイ・スループット・オートメーションと互換性を証明した.

結論:

  • BioRepli-seqは,DNA複製のタイミングを研究するための堅牢で汎用的なアプローチを提供します.
  • このプロトコルは,多様な細胞環境で全ゲノムRT分析を容易にする.
  • この方法は,ゲノム組織と複製ダイナミクスの研究を進めます.