ガス相ネイティブ（様）タンパク質の損失のないイオン操作のための構造を用いたキャラクタリゼーション

科学分野:

• 分析化学
• 生物物理化学
• 分離科学

背景:

• 損失のないイオン操作のための構造（SLIM）は、ガス相での高分解能イオン分離を提供します。
• 以前のSLIMアプリケーションはさまざまな分子クラスに焦点を当ててきましたが、タンパク質分析にはさらなる開発が必要です。

研究 の 目的:

• ネイティブ状態に近いガス相タンパク質を分離するためのマルチパスSLIMを調査すること。
• 電荷状態依存の到着時間分布とタンパク質のコンフォメーション変化を分析すること。
• SLIM由来の衝突断面積（CCS）値をドリフト管イオン移動分光法（DTIMS）と比較して検証すること。

主な方法:

• 炭酸脱水酵素（CA）、アルコールデヒドロゲナーゼ（ADH）、アポトランスフェリンのマルチパスSLIM分離を利用しました。
• Agilent Tune Mixイオンを使用した検量線を使用して実験的なCCS値を取得しました。
• CCS決定のために、マルチパス到着時間分布（ATD）をシングルパス値にデコンボリューションしました。
• SLIM由来のCCS値をDTIMS測定値と比較しました。

主要な成果:

• 8メートルのシングルパスSLIMでCA電荷状態（z=9+から11+）のベースライン分離を達成しました。
• 最大24メートルの経路長でADH（z=23+から25+）の移動ピーク分解能を改善しました。
• アポトランスフェリン（z=16+から18+）の単峰性から多峰性CCS分布への遷移を観察しました。
• 40メートルのマルチパス分離を使用して、特定の電荷状態（例：アポトランスフェリンz=17+）の選択的単離を実証しました。
• SLIM分離は、タンパク質構造とCCS値への影響は最小限でした。

結論:

• マルチパスSLIMは、ネイティブ状態に近いガス相タンパク質を効果的に分離し、電荷状態依存の構造を解決します。
• この技術は、DTIMSに匹敵する正確なCCS値を提供します。
• 移動選択的単離のためのSLIMの能力は、ネイティブイオン移動アプリケーションとさらなるSLIMベースの操作への道を開きます。