生理学的に関連性の高い3D CRISPRスクリーニングは、2Dスクリーニングと比較して化学的毒性のメカニズムに関する洞察を強化します

科学分野:

• 毒性学
• ゲノミクス
• 細胞生物学

背景:

• 毒性学におけるオミクスアプローチは、遺伝子と毒性効果の間の因果関係を欠いていることがよくあります。
• CRISPRスクリーニングは、毒性ゲノミクスにおけるこれらの因果関係を確立する方法を提供します。
• 既存のin vitroモデルは、in vivoシステムと比較して生理学的関連性が限られています。

主な方法:

• 回転バイオリアクター（ClinoStar）でHepG2 / C3Aスフェロイドを使用して3D CRISPRスクリーニングシステムを開発しました。
• 時間経過スクリーニングを実行して、スフェロイドの発達に影響を与える遺伝子を特定しました。
• 2Dシステムと比較して、ドキソルビシン毒性研究に3Dシステムを適用しました。
• 一般的なヒトの機能喪失変異を標的とするカスタムCRISPR sgRNAライブラリを利用しました。

結論:

• 3D CRISPRスクリーニングシステムは実現可能であり、生理学的に関連性の高い機能的毒性ゲノミクスを提供します。
• このプラットフォームは、毒性学における新しいアプローチ方法論（NAM）をサポートします。
• 化学誘発性毒性に影響を与える遺伝的要因を特定するためのスケーラブルな方法を提供します。