アンチセンスオリゴヌクレオチドの疎水性相互作用クロマトグラフィーによる精製

科学分野:

• 生化学
• 化学工学
• クロマトグラフィー

背景:

• 従来の陰イオン交換（AEX）および逆相クロマトグラフィーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの不純物除去において限界に直面しています。
• プロセス関連不純物（溶媒、低分子）および製品関連不純物（例：N-1、P=O1、分岐マー）は、オリゴヌクレオチド精製における課題です。

研究 の 目的:

• アンチセンスオリゴヌクレオチド精製のための代替不純物管理法として、HIC（疎水性相互作用クロマトグラフィー）を評価すること。
• オリゴヌクレオチド合成における収率と不純物分離能を最大化するためにHICパラメータを最適化すること。

主な方法:

• 樹脂リガンド、塩の種類、処理条件、グラジエントの種類、負荷比を含むHIC変数の体系的な評価。
• カラム負荷（DBCの32-78%）の最適化と、段階的洗浄および溶出グラジエントの使用。
• 低いリオトロピック塩濃度（≤50 mM）および段階的グラジエントを用いた精製産物の溶出。

主要な成果:

• HICは、プロセス関連溶媒および低分子を≥3 log10、失敗配列（EEI）を≥90%効果的に除去しました。
• HICは、分岐マー（LEI）、N-1不純物、P=O1不純物などの、除去が困難な製品関連不純物を大幅に低減しました。
• 最適化されたHICは、90%の収率と最大の不純物分離能を達成し、非極性不純物（LEI）をカラムに保持しました。

結論:

• HICは、アンチセンスオリゴヌクレオチドのための強力で、全水系、スケールアップ可能で、コスト効率の高い精製法です。
• HICは、単独技術として、または直交法（AEXなど）と組み合わせて、純度を高めるために使用できます。
• 適切に設計されたHICプロセスは、予測可能で高純度のオリゴヌクレオチド製品を提供します。