シングルベクター論理ゲートCAR T細胞のエンジニアリング：現在の制限を超える遺伝子サイズ

科学分野:

• 免疫療法; 分子工学; 細胞工学

背景:

• 合成Notch（synNotch）受容体で工学されたキメラ抗原受容体（CAR）T細胞は、特異性を高め、毒性を低下させます。従来の二重ベクターsynNotch-CARシステムは、二重形質導入と細胞選別の要件により、臨床的応用が制限されています。単一ベクターシステムにおける大規模形質導入遺伝子の製造上の課題は、CAR T細胞療法の開発を妨げています。

研究 の 目的:

• すべてのコンポーネントを1つのレンチウイルスベクターに統合する単一ベクターsynNotch（svsNotch）システムをエンジニアリングすること。大規模なレンチウイルス形質導入遺伝子に対する最適化されたCAR T細胞生産ワークフローを開発すること。臨床的応用を可能にするためのCAR T細胞製造における制限を克服すること。

主な方法:

• synNotch受容体と誘導性CARを統合した単一ベクターsynNotch（svsNotch）システムをエンジニアリングしました。大規模形質導入遺伝子の形質導入効率を高めるために、最適化されたCAR T細胞生産ワークフローを確立しました。卵巣がんの標的化とinvivoモニタリングのために、HER2-MSLN svsNotchおよびHER2-MSLN-CBG svsNotch構築物を構築しました。

主要な成果:

• 最適化されたワークフローにより、T細胞形質導入率が最大14.8倍増加し、9.2 kbを超えるトランスジーンを有するCAR T細胞の生産が可能になりました。HER2-MSLN svsNotch T細胞は、HER2+MSLN+腫瘍細胞を選択的に殺傷する優れた特異性を示しました。invivo研究では、HER2lowMSLNhighおよびHER2highMSLNhigh腫瘍に対するHER2-MSLN-CBG svsNotch T細胞の優れた有効性が実証されました。

結論:

• 単一ベクター論理ゲート免疫療法のためのフレームワークを確立しました。現在のサイズ制限を超えるトランスジーンを有するCAR T細胞を生成するための最適化されたワークフローを提供しました。標的がん治療のためのsvsNotch CAR T細胞の可能性を実証しました。