CIM QAモノリスを用いたアルギニン塩酸塩によるレンチウイルスベクターの回収および分離の強化

科学分野:

• バイオテクノロジー;生化学;細胞生物学

背景:

• LVVは、その大きなペイロード容量と非分裂細胞を形質導入する能力により、ex vivo細胞修飾に不可欠です。;現在のLVVのクロマトグラフィー精製方法は、回収率の低さ、不純物の共溶出、およびベクターの不安定性に悩まされています。

研究 の 目的:

• CIMmultus™ QA（CIM QA）モノリスを用いたLVV精製のための塩化ナトリウムの代替溶出液として塩化アルギニン（ArgHCl）を評価すること。;LVV精製中の感染性粒子安定性向上のための緩衝液条件を最適化すること。

主な方法:

• 感染性粒子安定性に最適なリン酸緩衝液濃度のスクリーニング。;ArgHClを溶出液として用いたCIM QAモノリスを用いたアニオン交換クロマトグラフィー（AEX）スクリーニング。;ナノフローサイトメトリーを用いた線形勾配溶出（LGE）実験および分析。

主要な成果:

• リン酸緩衝液濃度100-200 mMはLVV感染性粒子安定性を向上させました。;NaClと比較して、ArgHClは感染性粒子とp24抗原の両方の回収率を向上させました。;ArgHClで溶出した画分は、コロイド安定性の向上とクロマトグラフィー分解能の改善を示しました。;1.5 M ArgHClで71%の感染性粒子回収率の最大値が達成されました。;ナノフローサイトメトリーは、機能的（VSV-G陽性）粒子が濃縮された第2ピークを持つ2ピーク溶出プロファイルを特定しました。

結論:

• 塩化アルギニン（ArgHCl）およびリン酸緩衝液は、AEXクロマトグラフィーによるLVV精製中の回収率と安定性を大幅に向上させます。;本研究は、LVV精製のためのArgHClの優れた溶出液としての有用性を示しています。;ナノフローサイトメトリーは、精製開発中のLVV純度と感染性の迅速な評価に役立つツールです。