マーカーフリーCRISPR/Cas9ベースのトリパノソーマ属ゲノム編集プロトコル：選択なしの高精度編集

科学分野:

• 分子生物学
• 遺伝学
• 寄生虫学

背景:

• CRISPR-Cas9は、トリパノソーマ属やリーシュマニア属のようなトリパノソーマ属におけるゲノム編集のための強力なツールです。
• これらの寄生虫における従来のCRISPR/Cas9法は、特定の株、選択マーカーへの依存、および潜在的なゲノム不安定性などの制限があります。
• これらの制限は、多様な寄生虫株や複雑なゲノム修飾に対する広範な適用性を妨げます。

主な方法:

• 電気穿孔法による一時的なリボヌクレオプロテイン（RNP）複合体のデリバリー。
• ガイドRNA（gRNA）および修復テンプレート（カセット）の設計。
• RNPアセンブリ、電気穿孔法、およびクローナルスクリーニングのためのPCR/シーケンシングを含むマーカーフリープロトコル。

結論:

• 最適化されたマーカーフリーCRISPR-Cas9 RNPデリバリー方法は、トリパノソーマ属におけるゲノム編集を大幅に改善します。
• この技術は、多様なキネトプラスト類における遺伝子操作のための再現性があり、効率的で、適応可能なソリューションを提供します。
• このワークフローは、多重遺伝子編集や必須遺伝子の検証を含む、迅速な機能ゲノミクス研究を容易にします。