エンジニアリング鎖状分岐二特異性VHH複合体（「デンドロボディ」）スパイキャッチャーおよびスヌープキャッチャーペアリングの使用

科学分野:

• バイオテクノロジー; 免疫学; 抗体工学

背景:

• 二特異性抗体（bsAbs）は、免疫細胞を腫瘍細胞に誘導する上で有望です。bsAbsのタンデムに連結された単一ドメイン抗体（VHH）は、抗原結合領域の立体障害のために活性が低下する可能性があります。

研究 の 目的:

• bsAbsの立体障害を克服するために、新しいVHH複合体アーキテクチャであるデンドロボディを開発すること。二特異性および多特異性VHHベースの治療薬を構築するためのモジュラープラットフォームを作成すること。

主な方法:

• C末端VHH接合のために、直交するSpyCatcher/SpyTagおよびSnoopCatcher/SnoopTagシステムを利用しました。ワンポットライゲーションを介して、二特異性抗CD3/抗EGFRデンドロボディを生成しました。バイオレイヤー干渉測定法を用いて、複合体の折り畳み、熱安定性、および抗原結合を評価しました。

主要な成果:

• デンドロボディは正しい折り畳みと高い熱安定性（Tm = 56°C）を示しました。EGFR陽性がん細胞に対する強力なEGFR結合と選択的なT細胞媒介細胞毒性を示しました。デンドロボディ-CD16/EGFRバリアントによる抗原特異性とモジュール性を確認しました。

結論:

• デンドロボディフレームワークは、立体干渉を最小限に抑えたVHHベースのbsAbsを構築するための戦略を提供します。このアプローチは、がん治療のための機能的適応性と治療の可能性を高めます。