ガー原生体におけるCRISPR/Cas9媒介CtPDSノックアウトの最適化
Protik Kumar Ghosh1,2, Sudip Biswas1, Roly Malaker1
1Department of Soil and Crop Sciences, Texas A&M University, College Station, Texas, USA.
この研究は, guar (Cyamopsis tetragonoloba L. L.) のための最初の最適化された遺伝子編集プロトコルを導入しています. タウブ (タウブ) とは CRISPR/Cas9テクノロジーを用いたものです. 開発された方法は,作物の特性を改善するために原生体で100%の編集効率を達成します.
科学分野:
- 植物バイオテクノロジー 植物バイオテクノロジー
- ゲノミクスゲノミクスとは
- 農業科学 農業科学とは
背景:
- グアール (Cyamopsis tetragonoloba L. グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Cyamopsis tetragonoloba L.) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Guar) とは,グアール (Guar) とは タウブ (タウブ) とは 重要な工業的および農業的価値を持つ気候に耐性のある豆類です.
- 遺伝子編集は作物の改良に不可欠なツールですが, guarでのその応用は文書化されていないままでした.
- グアの貴重な特性を高めるための高度な遺伝的ツールへの需要が増加しています.
研究 の 目的:
- プロトプラストを用いてCRISPR/Cas9ゲノム編集のための最初の最適化されたプロトコルを作成する.
- この遺伝子編集システムの効率性と信頼性を実証するために, guar.
- 機能的ゲノミクスの基礎を築き, guar.における標的型特性の改善を目指す.
主な方法:
- テープサンドウィッチ法を使用して6日前の苗木コティレドンから,無傷で活性の高いガール原生体の最適化分離.
- 酵素的消化 (セルラーゼRS,ペクチナーゼ) と真空浸透によるプロトプラストの放出と活性の向上.
- ポリエチレングリコール (PEG) 媒介の変換プロトコルを開発し,GFPプラズミドと特定のプロモーターを使用して,高トランジント発現効率 (∼57%) を使用しました.
主要な成果:
- Cyamopsis tetragonoloba phytoene desaturase (CtPDS) 遺伝子を標的としたガール原生体で100%の編集効率を達成しました.
- PCR増幅とサンガー配列を介して非常に効率的な編集が確認され,CtPDSで7141061bpの断片削除が示されました.
- CRISPR/Cas9誘発による突然変異が,すべての変形したサンプルで成功していることが実証されています.
結論:
- CRISPR/Cas9 ゲノム編集のための信頼性の高い,一時的なプロトプラストシステムを確立しました.
- このプロトコルは,機能的ゲノミクスの研究と, guar.で標的の特徴の改善を可能にします.
- 遺伝子編集による guar作物改良の将来の進歩のための重要な基盤を提供します.
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