不溶性アフィニティタグによる再結合タンパク質の効率的な回復のために,コラム上の二重グラデントリフォールディング

科学分野:

• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 分子生物学は分子生物学である.
• プロテイン工学は,タンパク質の

背景:

• *Escherichia coli*における再結合タンパク質発現は,しばしばタンパク質の集積とインクルージョンボディの形成につながります.
• 透析や希釈などの伝統的な再折り畳み方法は,集積傾向のあるタンパク質に対して非効率である可能性があります.

研究 の 目的:

• 集積された再結合タンパク質,特にインクルージョンボディを形成するタンパク質を再折りたたむための効率的なプロトコルを開発する.
• 従来の方法の代替品として,Ni-TED樹脂の新しい二重梯度リフォールディング戦略を提示する.

主な方法:

• デュアル・グラディエント・リフォールド・システムは,Ni-TED樹脂に直接採用されました.
• このシステムは,カオトロピク剤の濃度が段階的に低下し,ノンイオン性洗剤の濃度が同時に増加することを含む.
• このプロトコルは,CRISPRに関連するエフェクタータンパク質CasV-M.のホモログを用いて実証されました.

主要な成果:

• ダブルグラデントアプローチは,タンパク質の結合を効果的に最小限に抑え,ネイティブのタンパク質構成の回復を促進しました.
• この方法により,透析または希釈と比較して,再現性と溶解性タンパク質の収量が改善されたことが示されました.
• Ni-TED樹脂は,高濃度のβ-メルカプトエタノールとの互換性を促進し,非特異的結合を減少させた.

結論:

• 開発されたプロトコルは,含有体から溶性機能性再結合タンパク質を取得するための有望な戦略を提供します.
• このアプローチは,集積傾向のあるタンパク質の幅広い範囲に適しており,従来の再折り畳み技術に対する代替案を提供します.
• Ni-TED樹脂の溶解化,再折り畳み,初期浄化の統合されたワークフローにより,効率が向上します.