マラリアベクトルの蚊種,血粉宿主源,プラズモディウムをナノポールのアンプリカン配列を用いて検出するためのマルチプレックスアッセイ

科学分野:

• エントモロジー エントモロジー学
• 分子生物学は分子生物学である.
• 寄生虫学とは,寄生虫学である.

背景:

• アノフェレス蚊は,世界中でマラリアを伝播するので,ベクトルの正確な識別,宿主の血液粉の源の決定,および寄生虫の検出が必要です.
• これらの分析のための現在の分子方法は,しばしば分離され,時間とコストが増加します.
• マラリアベクター監視のために,統合された,効率的で費用対効果の高い分子ツールが必要です.

研究 の 目的:

• 蚊種を特定し,血粉源を特定し,プラズモディウム寄生虫を検出するための同時分子測定法を開発し,検証する.
• オックスフォード・ナノポア・テクノロジー (ONT) ミニオン・シーケンサーを,この統合解析のための費用対効果の高いプラットフォームとして評価する.
• マラリアベクトル監視のためのナノポアシーケンシングプラットフォームの高スループット能力を実証する.

主な方法:

• 150匹の昆虫飼育蚊 (9種) と150匹の血食蚊 (5種) の配列をONT MiniIONを用いて決定した.
• 40の感染した蚊のサンプルにおけるプラズモディウム・ファルシパラムの存在の分析.
• 種識別,血粉分析,寄生虫検出を単一のナノポールのシーケンシング実行に統合した組合せアッセイの開発.
• ナノポーレシーケンシングの結果と標準的なサンガーシーケンシングプロトコルの比較.

主要な成果:

• MinIONプラットフォームは,9種類の蚊と5種類の血液粉の源を,餌を与えられた後48時間以内に正確に特定しました.
• プラズモディウムファルシパラムは,すべての40の陽性対照サンプルで成功裏に検出されました.
• ナノ孔配列解析の結果はサンガー配列解析と高度に一致し,比較可能な正確性と信頼性を示した.
• 統合アッセイは,単発で処理された96個のサンプルで,高いスループット能力を実証しました.

結論:

• 開発されたONT MinIONベースのプロトコルは,蚊の種を同時に識別し,血粉を分析し,寄生虫を検出するための新しい,非常に正確で費用対効果の高いソリューションを提供します.
• この統合的アプローチは,マラリアベクトル監視と流行病学的研究に重大な利点をもたらします.
• ナノポールのシーケンシングプラットフォームは,ベクトル媒介疾患の研究における分子診断のための実行可能で効率的なツールです.