豚の胚にCas9の変種を用いて,遺伝子編集の結果の特異性を高める

Jaehwan Kim¹, Junchul Yoon¹, Jasmine Chen¹

¹Division of Animal Science, College of Agriculture Food and Natural Resources, University of Missouri, Columbia, MO, USA.

Journal of animal science

|February 12, 2026

まとめ

eSpCas9のような高精度CRISPR/Cas9の変種は,家畜の遺伝子編集特異性を改善する. これらの変異は,豚の胚の精密な遺伝子改変を可能にし,より安全な家畜の発達のために標的外変異を最小限に抑えます.

科学分野:

遺伝子編集技術とは
CRISPR/Cas9システムについて
家畜の遺伝子組み換え

背景:

CRISPR/Cas9技術は,様々な種の標的型ゲノム修正を可能にします.
遺伝子組み換え家畜モデルは,病気の研究と食品生産において極めて重要です.
ストレプトコッカス・ピオゲネスCas9 (SpCas9) の標的外変異は大きな懸念事項である.

研究の目的:

豚の胚における高精度SpCas9変種 (eSpCas9,HiFi Cas9,LZ3 Cas9) の有効性と特異性を評価する.
これらの変異を用いて意図しないゲノム改変の可能性を評価する.

主な方法:

Cas9変種をコードするmRNAと,IGHロクスを標的とする単一ガイドRNA (sgRNA) を受精した豚の卵胞に注入した.
オン・オフ・ターゲティング周波数は,ブラストシスト段階の胚からのゲノムDNAのサンガー配列解析によって分析されました.
オフターゲットの分析には,IGH,AR,RBFOX1領域が含まれていました.

主要な成果:

SpCas9は100%のオンターゲットの編集を証明したが,ARとRBFOX1.1では高いオフターゲットのイベント (>60%) を示した.
Cas9の変種 (eSpCas9,HiFi Cas9,LZ3 Cas9) は,検出可能なオフターゲット変異なし,100%のオンターゲット効率 (LZ3 Cas9を除いて59.1%で) を示しました.
eSpCas9とHiFi Cas9はブラストシストの発達を支えており,eSpCas9を改変した胚の体内移植により,100%のオンターゲット編集とオフターゲットイベントのない胎児が生まれた.

結論:

高精度Cas9変種,特にeSpCas9は,より高い特異性を提供し,豚胚の非標的変異を最小限に抑えることができます.
eSpCas9は優れた特異性を示し,遺伝子編集された胎児の成功 in vivo 開発を支援しました.
Cas9の多様性を利用することは,家畜のモデルにおける遺伝子編集アプリケーションを進めるための有望な戦略です.

キーワード:

CRISPR/Cas9は,CRISPR/Cas9と一致している.Cas9のバリエーションは,Cas9のバリエーションである.off-targeting (オフターゲティング) について豚の胚は豚の胚である

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