バチルス・メタノリックスMGA3におけるCRISPR-Cas9駆動のゲノム編集

科学分野:

• 微生物学 微生物学とは
• 分子生物学は分子生物学である.
• バイオテクノロジー バイオテクノロジー

背景:

• バシルス・メタノリクス (Bacillus methanolicus) は,メタノールを使用する能力のために産業で使用される熱愛性メチロトロフです.
• 効率的な遺伝的ツールは,産業微生物の代謝工学にとって極めて重要です.

研究 の 目的:

• バシルス・メタノリックスMGA3.3のCRISPR-Cas9ゲノム編集システムを開発し,検証する.
• B. methanolicus. の精密な遺伝子削除,置換,変異を可能にするために.

主な方法:

• B. methanolicus.のために1つのプラズミドのCRISPR-Cas9システムが設計されました.
• ゲノム改変のために利用されたネイティブDNA修復経路 (同種の再結合と末端結合).
• 傷跡のない遺伝子削除と置換のためのホモロジー指向の修復と,変異遺伝子の末端結合に誤差がつきやすいことを利用しました.

主要な成果:

• KatAとAlD遺伝子を削除し,それに対応する酵素活性低下を成功させた.
• ゲノムシーケンシングとフェノタイプ分析による遺伝子編集が確認されました.
• katAをmcherryに置き換え,PCRと光で確認した標的遺伝子挿入を達成しました.
• ゲノム編集の全体的な高効率が85%を超えていることが実証されています.

結論:

• 開発されたCRISPR-Cas9システムは,B. methanolicus. の遺伝子操作のための正確で効率的なプラットフォームを提供します.
• このツールは,熱愛性メチロトロフにおける代謝工学の戦略を進めるのに価値があります.
• このシステムは,無痕の遺伝子編集と,株の改善のための標的の遺伝子挿入を容易にする.