マイクロドロップレットトリプシン消化による急速抗体の構造的特徴と定量化

科学分野:

• バイオケミストリーとプロテオミクス
• アナリティカル・ケミストリー (Analytical Chemistry) とは
• バイオ医薬品分析について

背景:

• タンパク質の構造的特徴化は,バイオ医薬品にとって極めて重要です.
• モノクローナル抗体 (mAbs) は,迅速かつ正確な分析方法が必要です.
• タンパク質の消化と定量化のための既存の方法は,時間がかかる可能性があります.

研究 の 目的:

• 迅速な抗体特徴と定量化方法を開発する.
• 超高速のタンパク質分析のためにオンラインのマイクロドロップレットトリプシン消化を利用する.
• 精密なペプチドマッピング,改変の特定,およびmAbs.の絶対的定量化を可能にするために.

主な方法:

• オンラインのマイクロドロップレットトリプシン消化により,超高速なタンパク質消化 (<1 ms,>90%効率) が可能です.
• 質量スペクトロメトリー (MS) とペプチドマッピングと改変分析のためのMS/MS.
• 標準ペプチドと重イソトープで標識された抗体でピッキングし,絶対的な量化を行う.

主要な成果:

• MS/MS.を使用してNIST mAbでN387で主要なデアミデーションを特定しました.
• 絶対定量を使用してメチオニンの酸化を測定し,精度が向上しました.
• 敏感で正確な絶対抗体定量化 (R2=0.99,LOD=1.2 ng,0.6-10%の誤差) が達成されました.

結論:

• マイクロドロップレット消化法は,抗体特徴化のための迅速かつ効率的なアプローチを提供します.
• 開発された方法は,翻訳後の改変と抗体レベルの正確な絶対定量化を提供します.
• このテクニックは,速さ,感度,精度を提供するバイオ医薬品分析に価値があります.