BSL-2の安全規制に適合するネイティブの全長型TDP-43のリフォールディング・アシスト・プリーフィケーション

科学分野:

• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 分子生物学は分子生物学である.
• 神経科学は神経科学である.

背景:

• TARDNA結合タンパク質43 (TDP-43) は,ALSやFTDのような神経変性疾患に関与している.
• 現在の安全規制では,プリオン型タンパク質の生物安全レベル-2 (BSL-2) の封じ込めが必要であり,TDP-43の生産を複雑にしています.
• 完全なTDP-43の一貫した生産は,in vitro研究にとって不可欠です.

研究 の 目的:

• TDP-43.3の再折り補助浄化プロトコルについて説明します.
• 標準のBSL-2ラボで,ネイティブに似たTDP-43の安全で費用対効果の高い生産を可能にします.
• 他のプリオンのような,集積傾向のあるタンパク質に適応可能な方法を提供するため.

主な方法:

• Escherichia coli.で全長TDP-43の発現について
• デナチュレーション条件下 (4M尿素) でEDTA/DTT耐性Ni2+-NTA樹脂を用いたIMAC捕獲.
• グラデント尿素洗浄によるコラム上の再折り畳み,その後SUMOタグの除去と品質管理パイプライン (SDS-PAGE,免疫ボルトリング,質量写真測定,CD,光アニソトロピー,光散乱) による.

主要な成果:

• 溶解分からTDP-43の再折り補助浄化のための堅牢なプロトコル.
• 標準的なBSL-2ラボの基本的な設備で実施可能です.
• 総合的な品質管理パイプラインは,タンパク質の完全性,純度,オリゴメリック状態,二次構造,および安定性を保証します.

結論:

• 開発されたプロトコルは,ネイティブのようなフル長さのTDP-43.3に安全で,費用対効果が高く,再現可能なアクセスを提供します.
• このプロトコルには,プリオンのようなタンパク質を扱うためのBSL-2標準操作手順が含まれています.
• この方法は,他の集積傾向のあるタンパク質を生産するのに容易に適応できます.