piggyBacトランポゼスmRNAとピエゾアシストされたマイクロインジェクションを使用して,長いDNA挿入を持つトランスジェニックラットの非常に効率的な生産

科学分野:

• * 遺伝学とゲノミクス
• * 動物バイオテクノロジー
• * 分子生物学 * 分子生物学

背景:

• * 核前微量注射による従来のトランスジェニック (Tg) 動物生産は非効率であり,専門的なスキルが必要です.
• *PiggyBacトランポゼ (PBase) は,Tg動物の生成のためにより効率的なDNA挿入方法を提供します.
• *ラットにおけるPBaseの適用は,さらなる最適化と特徴づけが必要である.

研究 の 目的:

• * PiggyBacトランポザーゼ (PBase) mRNAとピエゾアシストされたマイクロインジェクションの使用を最適化し特徴づけ,効率的なトランスジェニックラット生成を図る.
• *この新しい方法を用いて,トランスゲン統合と生殖線伝播の効率を評価する.
• * アルツハイマー病などの疾患モデルを作成するためのこの技術の可能性を調査する.

主な方法:

• *ピエゾアシスト技術を使用して,PBase mRNAとドナープラズミドDNAをネズミのジゴート前核に微量注入する.
• *マイクロ注射後のジゴットの生存能力の評価.
• *胚移植と,子 (F1とF2世代) でのトランスゲン統合と生殖線伝播の分析.

主要な成果:

• *ピエゾアシストされたマイクロインジェクションにより,ジゴットの生存率70%以上を達成しました.
• * 生まれた子犬の80%以上は,胚移植後のトランスゲンを携えていた.
• *次の世代 (F1およびF2) に生殖線伝播が確認された.

結論:

• *PiggyBacトランスポザースmRNAとピエゾアシストされたマイクロインジェクションを組み合わせた方法は,大きなDNA構造を持つラットであっても,トランスジェニックを生産するためのシンプルで効率的な方法です.
• * この技術は,従来のマイクロインジェクション方法よりも大幅に改善されています.
• *アルツハイマー病のような特定の疾患のモデルを生成することは依然として困難ですが,この方法は一般的なTgラット生産に非常に有効です.