RPA-CRISPR/Cas 12aアッセイを用いた,乳牛の腹の病原体に対する,敏感で,特異的で,迅速な現場検出

科学分野:

• 獣医学診断 獣医学診断
• 分子生物学は分子生物学である.
• 家畜の健康について

背景:

• 牛の腹は,牛の畜産業界に重大な経済的損失をもたらします.
• 現在の小牛腹の診断方法は,最適の感度,特異性,単純性,費用対効果,速度が欠けている.
• 乳児腹の早期発見と管理のために,現場での診断ツールの改善が必要である.

研究 の 目的:

• 複数の小牛腹の病原体を検出するための新しい,高度に敏感で,特定で,シンプルで,迅速な測定法を開発する.
• 牛の現場で適用するために開発されたアッセイのパフォーマンスを評価する.

主な方法:

• 牛のウイルス性下痢ウイルス (BVDV),牛のコロナウイルス (BCoV),牛のロタウイルス (BRV),および腸毒性Escherichia coli (ETEC) の同時検出のための4倍RPA-CRISPR/Cas12aアッセイの開発.
• 標的病原体を検出する際の感度,特異性,および速度について評価されたアッセイ性能.
• 単一の定量ポリメラーゼ連鎖反応 (qPCR) 方法との四重検査の比較.

主要な成果:

• RPA-CRISPR/Cas12aアッセイは,BVDV,BCoV,BRV,ETECを10コピー/μLまで低濃度で検出することに成功しました.
• このアッセイは高い特異性を示し,他の病原体の存在で偽陽性結果は認められませんでした.
• BCoV,BRV,ETECに対する感受性は単一のqPCRに匹敵し,BVDVの感受性は単一のqPCRよりもわずかに低かった.
• 試料の準備を含むテストプロセスは50分以内に完了しました.

結論:

• RPA-CRISPR/Cas12aアッセイは,小牛の主要な下痢病原体を現地で検出するための,敏感で,特異的で,シンプルで,迅速なツールです.
• この検査は,既存の診断方法に対する実用的で改善された代替手段であり,牛産業界における経済的損失を軽減する可能性がある.