Cryo-ET標本品質の定量的な評価と最適化のためのクリオ-CLEMによるワークフロー

科学分野:

• 細胞および分子イメージング
• 構造生物学 構造生物学とは
• 顕微鏡技術 顕微鏡技術について

背景:

• 低温相関光電子顕微鏡 (cryo-CLEM) は,低温電子トモグラフィ (cryo-ET) のターゲティングに不可欠です.
• 低温条件下での冷凍-CLEMシステムのイメージング性能は,十分に特徴づけられず,その完全な可能性を制限しています.
• サンプルの品質を最適化することは,成功する冷凍ETデータ取得に不可欠です.

研究 の 目的:

• 2つの商用クライオ-CLEMシステムの画像処理能力を評価・比較する.
• クリオ-CLEMシステムの空間解像度と信号対ノイズ比 (SNR) を定量化するために.
• Cryo-ETの標本品質を評価するためのツールとしてcryo-CLEMを確立する.

主な方法:

• 2つのクライオ-CLEMシステムの定量評価:ライカEMクライオ-CLEMとサーモフィッシャーサイエンティフィック iFLM.
• GFPで標識されたタンパク質を発現するガラス化した細胞標本を用いた評価.
• 空間解像度および信号対ノイズ比 (SNR) の測定.

主要な成果:

• Leica EMの冷凍CLEMシステムは,より高いSNRと,タイルのイメージングによるより速い取得を提供しました.
• サーモフィッシャーサイエンティフィック iFLMは,より広い視野を提供し,互補的な強みを実証しました.
• 光強度とラメラの厚さの間の定量的な相関が確立されました.

結論:

• Cryo-CLEMシステムは,cryo-ETの標本準備に補完的な強みを備えています.
• Cryo-CLEMイメージングは,ラメラの厚さと品質に関する定量的なフィードバックを提供します.
• このフィードバックは,試料の品質の早期最適化を可能にすることで,冷凍-ETのワークフローを効率化します.