プラズマ中のフォスフォロダイアミド酸モルフォリノオリゴヌクレオチドのLC-MS/MSバイオアナリティクスのシンプルで非常に敏感な方法

科学分野:

• アナリティカル・ケミストリー (Analytical Chemistry) とは
• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 薬理学 薬理学とは

背景:

• LC-MS/MSを用いたフォスフォロダイアミド酸モルフォリノオリゴマーの定量化は,感度が低いため,課題に直面しています.
• 従来の固体相抽出法では,これらの特定のオリゴマーの回収率は低い.
• オリゴマーの正確な決定のために最適化された前処理を備えた,より敏感なバイオ分析法が必要である.

研究 の 目的:

• プラズマにおけるフォスフォロダイアミド酸モルフォリノオリゴーマーを定量化するための非常に敏感なバイオ分析方法の開発および検証.
• 回復と感受性を高めるために,既存の前処理技術を改善する.
• 様々なフォスフォロダイアミダートモルフォリノオリゴーマーに適用できる堅固な方法の確立.

主な方法:

• 試料の前処理のためにメタノールによるタンパク質降水 (PPT) を利用し,ビルトラーセンで高い回収率 (>90%) を達成した.
• 逆相液体染色法 (RPLC) を gradient elutionで使ってイオン抑制を最小限に抑える.
• LC-MS/MS分析を最適化するために,PPTとRPLCを組み合わせました.

主要な成果:

• ヴィルトラーセンの定量化下限1ng/mLを達成し,承認されたオリゴマー (10-20ng/mL) よりも有意に高い感度を達成した.
• ラン間の精度 (97.1%109%) と精度 (2.56%10.5%) を示した.
• この方法を別のフォスフォロダイアミド酸モルフォリノオリゴーマー, ψM23D (+07-18) に成功裏に適用しました.

結論:

• RPLCとPPTを最適化することによって,ヴィルトラーセンを決定するためのシンプルで高度に敏感なバイオ分析法を確立しました.
• 異なった配列を持つフォスフォロダイアミド酸モルフォリノオリゴーマーに対する方法の適用性を検証した.
• 開発された方法は,オリゴマーの定量化のための感度と回収の改善を提供します.