ATPの水解とCRISPR/Cas12aによるアルカリリンフォスファターゼの活性検出

科学分野:

• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 分子生物学は分子生物学である.
• 食品科学 食品科学について

背景:

• アルカリリンフォスファターゼ (ALP) は,家畜の健康,栄養,乳の安全性における重要なバイオマーカーです.
• ALPの正確かつ迅速な検出は,食品安全および食品科学のアプリケーションにとって極めて重要です.

研究 の 目的:

• 食品サンプルにおけるアルカリリンフォスファタゼ (ALP) 活性を検出するための新しい,敏感で迅速な方法を開発する.
• ALP検出のためのCRISPR/Cas12aシステムと組み合わせたATP水解を利用する.

主な方法:

• ATP固有のアプタマーとアクティベーター鎖を含むDNA分子認識ロックプローブシステムが設計されました.
• このアッセイは,ATPの水解によって誘発されるCRISPR/Cas12aのトランス・クリアゲージ・アクティビティを活用するか,ALP媒介の脱リン酸化によって抑制される.
• 光信号の生成は,Cas12aタンパク質の活性化に依存しています.

主要な成果:

• このアッセイでは,ALP活性に対する検出限界2.52 mU/mLを達成し,線形範囲は0〜18.75 mU/mLであった.
• 合計検出時間は70分に最適化されました.
• 様々な家畜のサンプルと牛乳に成功裏に適用され,回収率は92-99%です.

結論:

• 食品サンプルでALPを検出するための,敏感で,費用対効果があり,迅速な方法が成功裏に開発されました.
• この新しいアッセイは,食品安全モニタリングのためのポイント・オブ・ケア・テスト (POCT) デバイスの開発に希望を示しています.