Cas-CLOVERによる配列,染色体特異のグルタミン合成酵素ダブルノックアウトは,細胞系開発のための強化されたCHOプラットフォームを確立します

科学分野:

• バイオテクノロジー バイオテクノロジー
• 分子生物学は分子生物学である.
• ゲノミクスゲノミクスとは

背景:

• 中国ハムスター卵巣 (CHO) のK1細胞は,バイオ医薬品生産に不可欠です.
• 高生産性の細胞系を開発するには,効率的なゲノム編集戦略が必要です.
• グルタミン合成酵素 (GS) ノックアウト CHO 細胞は,高収量クローン選択を促進します.

研究 の 目的:

• Cas-CLOVERの効率を評価するために,バイオ医薬品生産のための工程サスペンションに適応したCHO-K1細胞.
• 細胞系開発 (CLD) のための堅牢で遺伝子編集されたプラットフォームを確立する.
• Cas-CLOVERとCas9をGSロシエーションの編集のために比較する.

主な方法:

• Cas-CLOVERとCas9は,CHO-K1細胞のGS5とGS1ロキーを編集するために使用されました.
• 配送にはNeonTMトランスフェクションシステムを使用しました.
• デュアルガイドRNA設計は,シングルとダブルノックアウトラインを生成するために活用されました.
• 安定したトラストズマブ発現のために,ハーバー-INトランポゼス系を使用した.

主要な成果:

• Cas-CLOVERは,Cas9.9と比較して,GS5で84%で,GS1で74%で編集効率が高く示されました.
• 生成されたGSノックアウトラインのための40の予測されたサイトで,オフターゲットの突然変異は検出されなかった.
• CleanCut GS CHOプラットフォームは,生産性 >100 pg/細胞/日とタイター >5 g/Lの高生産性クローンを生産しました.
• 抗体タイトルの安定性は60世代以上維持された.

結論:

• Cas-CLOVERは,CHO細胞工学のための非常に効率的で正確なゲノム編集ツールです.
• 開発されたCleanCut GS CHOプラットフォームは,厳格な選択と高収量クローン生成をサポートしています.
• Cas-CLOVERは,バイオ医薬品生産における細胞系開発を促進するための汎用的なツールです.