液体の追跡可能な屈折指数測定は,細胞外膀のフローサイトメトリーを標準化するためのものです
Martine Kuiper1,2,3,4, Richard Koops1, Rienk Nieuwland2,3
1VSL, National Metrology Institute, Delft, the Netherlands.
まとめ
フローサイトメトリーを用いた細胞外膀 (EV) 濃度の正確な測定には,懸浮液の正確な屈折指数 (RI) 値が必要です. 追跡可能なRIを使用すると,EVサイズと濃度定量的測定の正確性が向上します.
科学分野:
- バイオメディカルエンジニアリング
- アナリティカル・ケミストリー (Analytical Chemistry) とは
- バイオフィジックス 生物物理学
背景:
- 細胞外小胞 (EVs) は,体液に含まれる重要なバイオマーカーです.
- フローサイトメトリーは,光の散乱に依存して,EV濃度を定量化するために使用されます.
- 正確なサイズと定量化は,周りの媒体の正確な屈折率 (RI) を要求するミエ理論に依存します.
研究 の 目的:
- EV分析で使用される一般的なサスペンション液体の追跡可能な屈折率 (RI) を測定するために.
- EVサイズと濃度測定に対するRI精度の影響を評価する.
- EVフローサイトメトリーの精度を向上させるための勧告を提供すること.
主な方法:
- ダルベッコのフォスファットバッファリ塩水 (DPBS) と,希釈されたヒト血に対するRIの追跡可能な測定.
- 波長405~644nmの波長が利用され,不確実性は1.4
× 10 - 5 $$ 1.4\times {10}^{-5} $$ である. - ミエ理論とフローサイトメトリを用いて,想定された対測定されたRIから派生したEV濃度を比較した.
主要な成果:
- DPBSとプラズマの希釈のための追跡可能なRIは正確に決定されました.
- 想定されたRIと測定されたRIの差異は,光学直径のゲートと報告されたEV濃度を大幅に変化させた.
- ロゼッタ校正におけるDPBSの現在想定されているRIを使用すると,EV濃度における9%から35%の不一致が生じました.
結論:
- サスペンション液体の正確なRI測定は,信頼性の高いEV定量化に不可欠です.
- EVフローサイトメトリの校正における現在のRI仮定は,重要な測定エラーにつながります.
- 追跡可能な測定RIをミエ理論計算で実装することで,EV光学直径と濃度測定の精度が向上します.
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