血漿および容量吸収型マイクロサンプル中におけるトリメチルアミン-N-オキシドのLC-MS/MS定量：小児腎移植レシピエントにおける分析的妥当性確認および実現可能性

トリメチルアミン N-オキシド（TMAO）は、腎損傷や心血管リスクに関連する可能性がある腸内細菌叢由来の代謝物です。腎移植後の小児におけるTMAOの測定は、腸・腎・心血管軸の研究を支援する可能性がありますが、小児の縦断的研究において繰り返しの静脈採血を行うことは、多くの場合、現実的ではありません。本研究では、血漿および、容積吸収マイクロサンプリング（VAMS）を用いて採取した10 μLの乾燥毛細血管血検体中のTMAOを測定するための、迅速なLC-MS/MS法の妥当性を検証することを目的としました。TMAOの定量には、安定同位体標識内部標準であるTMAO-dを用いました。₉、ポジティブエレクトロスプレーイオン化を用いた親水性相互作用クロマトグラフィー（HILIC）により測定した。内因性分析物であるTMAOについては、血漿にはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中5%牛血清アルブミンの代替マトリックスを、VAMSには代替全血マトリックスを用いて検量線を作成した。品質管理サンプルは、実際のマトリックスを用いて調製した。バリデーションプロセスでは、検量線、下限定量限界（LLOQ）、正確度、精度、回収率、マトリックス効果、安定性、再分析（ISR）、マトリックスの平行性、および血漿とVAMSの結果の比較可能性を検討した。アッセイの検量線は0.1から20 μmol/Lの範囲で直線的であった。LLOQはいずれのマトリックスにおいても0.1 μmol/Lであった。平均検量R²値は、血漿で0.9989 ± 0.0007、VAMSで0.9981 ± 0.0011であった。サロゲートマトリックスと真のマトリックスは同様のパラレリズムを示した（血漿の傾きは0.97、VAMSは0.93）。小児腎移植集団において、血漿TMAOは血清クレアチニンと高い正の相関（r = 0.964）を示し、eGFRとは負の相関（r = -0.788）を示した。VAMSを用いて推定した血漿TMAOについても、クレアチニン（r = 0.951）およびeGFR（r = -0.784）との間で同様の関連が観察された。本バリデーション済み手法により、血漿およびVAMSマイクロサンプルの両方においてTMAOの信頼性の高い定量が可能となり、小児腎移植における将来的な縦断的バイオマーカー研究への分析的妥当性が示された。ただし、これらの臨床的知見は、臨床的有用性の根拠ではなく、探索的なものであると見なされるべきである。