培養された哺乳類の細胞にDNAを直接マイクロ注入することによって高効率の変換

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 細胞生物学 細胞生物学
• 遺伝学 遺伝学とは

背景:

• 哺乳類の細胞にはしばしば特定の酵素活性が欠け,その成長と機能を阻害する.
• 遺伝子転送技術は,遺伝子機能を研究し,細胞療法を開発するために不可欠です.
• ヘルペス・シンプレックスウイルスチミジンキナーゼ (HSV-TK) 遺伝子は,遺伝子転送研究における重要な選択性マーカーである.

研究 の 目的:

• 哺乳類の細胞への遺伝子転送のための直接DNAマイクロインジェクションの効率を調査する.
• 遺伝子発現と変異のための最適な配達部位 (核対細胞質) を決定する.
• 変換周波数に対するプラズミドDNA構造の影響を評価する.

主な方法:

• グラスマイクロピペットを用いてDNAを培養LMTKマウス細胞に直接マイクロ注入する.
• HSV-TK遺伝子を細胞核または細胞プラズマに送り込む.
• HAT媒介 (TK+選択媒介) を使用した変形細胞の選択.
• プラズミドDNA構造に基づく変換周波数の分析.

主要な成果:

• HSV-TK遺伝子の核マイクロインジェクションにより,TK酵素活性を発現する細胞の50-100%が得られました.
• 細胞プラズマ注射は検出可能なTK活性をもたらさなかった.
• 変換頻度はプラズミドDNAによって変化した;pBR322/TKは500-1000細胞につき1つの変容体を生成した.
• プラズミドにSV40DNA配列を含めると,変換頻度が5つの細胞のうちの1つに増加しました.
• 変換頻度は,DNA濃度とキャリアDNAから大きく独立していた.

結論:

• 直接核マイクロインジェクションは,哺乳類の細胞に機能的な遺伝子を導入するための非常に効率的な方法です.
• DNA配送の細胞部門は,遺伝子発現と変異を決定的に影響する.
• プラズミドDNAの設計は,遺伝子転送と細胞変換の効率に大きな影響を与えます.